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一、研究背景:胶质瘤是一种常见的颅内恶性肿瘤,约占颅内肿瘤的40%-50%,对其治疗至今尚没有明显进展,且发病原因仍不太清楚,目前越来越多的认为与某些蛋白的表达有关系。在胶质瘤的不同细胞类型,不同分化阶段,不同分级,都有不同的蛋白的表达发生改变,研究并检测这些蛋白标记物,同时结合对肿瘤细胞增殖活性的检测,对于疾病的诊断,治疗,和了解肿瘤的发生机制具有临床和理论意义。热休克蛋白(Heat shock proteins,HSPs)是生物体受到物理、生物、化学、精神等刺激时所发生应激反应而合成的一种高度保守的蛋白质。这是因为温度升高后增强了这一区域的基因转录,从而相应生成的蛋白质被命名为热休克蛋白质(HSPs)。HSPs主要参与一些重要的细胞生理活动,比如蛋白质转位、装配和折叠,除此之外,各种刺激因素诱导HSPs合成后,可使细胞结构稳定,维持细胞正常生理功能,提高机体相应适应能力(如耐热、耐寒、抗感染、抗毒素等)。热休克蛋白根据同源程度和分子量从小到大可分为:小分子HSP、HSP10、HSP40、HSP60、HSP70、HSP90、HSP110及泛素等几个家族。其中HSP60和HSP70具有高度的物种保守性,系热休克蛋白的两个重要的家族。HSP70已被深入研究,现已被证实HSP70在肿瘤表达异常,能与癌基因,抑癌基因产物结合,并参与肿瘤细胞的细胞周期调控、增殖、调往、分化、多药耐药、肿瘤免疫以及肿瘤细胞的发生发展密切相关。而对HSP60的研究相对较少,尤其是在胶质瘤方面的研究更加少见。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate apecfic protease, Caspase)家族是一大类凋亡调节基因,是哺乳动物细胞凋亡的启动者和执行者。其中Caspase-3是Caspase级联“瀑布“下游最关键的凋亡执行蛋白酶,在各种因素启动的凋亡程序中起到最后枢纽作用,在其他下游的Caspase成员相比,可能是凋亡时间的真正执行者。在正常情况下,Caspase-3以无活动的酶原形式存在于哺乳动物的多种组织和细胞内,其在免疫细胞、脑和胚胎起源的细胞中有高水平表达。细胞凋亡机制调控失衡,导致细胞死亡减少,细胞异常增殖,相关肿瘤发生。既往研究显示,Caspase-3在脑肿瘤细胞凋亡过程扮演重要角色。并且对脑肿瘤的放疗、化疗过程中,Caspase-3诱导的细胞凋亡机制研究提示,脑肿瘤的发生不仅与神经细胞的异常增强和分化有关,也与细胞凋亡的异常有关。本文用免疫组化方法检测64例胶质瘤手术标本中HSP60、Caspase-3的表达,分析两者与肿瘤增殖、凋亡和细胞分化的关系。二、研究对象和方法1.研究对象:收集来自中南大学湘雅附属第二医院病理科2005年3月到2009年12月间诊断为胶质细胞瘤的手术存档标本共64例。按2000年WHO制定的神经系统肿瘤分类和分级标准分为:Ⅰ级10例,Ⅱ级18例,Ⅲ级19例,Ⅳ级17例。其中男性41名,女性23名,年龄7~65岁,平均34.6岁。2.免疫组化染色免疫组化染色用SP法。一抗分别为鼠抗人Caspase3单克隆抗体和鼠抗人HSP60单克隆抗体。3.结果判定:采用双盲法对每张切片在高倍镜(x400)下计数5个高倍视野。以染色阳性细胞比例分别计为:阳性细胞蕊5%为阴性(一);阳性细胞数6%-25%弱阳性(+);阳性细胞数26%-50%为阳性(++);阳性细胞数51~100%为强阳性(+++)。三、结果1.HSP60与Caspase 3蛋白免疫组织化学染色阳性结果为棕黄色颗粒,HSP 60阳性颗粒主要定位于肿瘤细胞核和细胞浆内,Caspase3阳性颗粒主要定位于肿瘤细胞浆内。2.随着胶质瘤病理级别的增高,HSP60的表达强度增加,Ⅰ-Ⅳ级胶质瘤的HSP60阳性率分别为20%、72.2%、89.4%、100%(P<0.01)。3.随着胶质瘤病理级别的增高,Caspase-3的表达强度减弱,Ⅰ-Ⅳ级胶质瘤的Caspase3阳性率分别为90%、77.7%、36.8%、23.5%(P<0.01)。4.胶质瘤中,Caspase 3与HSP60的蛋白表达间存在负相关关系(P<0.01)。四、结论HSP60与Caspase 3蛋白的表达结果提示,两者与胶质瘤的生物学行为和分化程度有关,对不同级别胶质细胞瘤中HSP60和Caspase3蛋白的表达进行联合检测,不仅有助于判断胶质细胞瘤恶性程度,并且有助于为肿瘤的发病机制提供理论依据。