水产品中孔雀石绿的稀土铕荧光快速检测体系的研究与应用

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孔雀石绿(Malachite Green,MG)是一种人工合成的三苯甲烷类化合物,是一种有效的水产养殖杀菌剂,作为治疗真菌和原虫感染的药物,能起到驱虫杀菌,延长鱼类的存活时间的作用,曾广泛应用于水产养殖业。MG具有高残留、高毒性,会产生致畸、致癌、致突变等“三致效应”,食用含有MG残留的水产品,会损害人体肝、肾等器官,还会引起细胞致癌、基因突变、对皮肤、肠胃产生刺激,对生物体造成永久性伤害。目前检测MG的主要方法包括色谱及其联用法、电化学法和免疫学法等。虽然这几种检测方法灵敏度高、选择性好,但都需要依靠大型仪器进行分析,且样品前处理复杂、操作繁琐、仪器昂贵等,这些缺点限制其在实际样品检测中的使用。因此寻找快速高效的MG检测方法仍有十分重要的意义。本文结合稀土配合物制备了荧光探针,实现了对MG的快速检测。研究内容分为以下三部分:第一部分,以铕(Eu3+)为中心离子,甲基丙烯酸(Maa)和邻菲罗啉(Phen)为配体,在温和条件下制备了一种稀土配合物Eu(Maa)3Phen。该配合物在618 nm具有荧光发射峰,斯托克斯(Stokes)位移大,特征发射峰窄,半峰宽只有15 nm。由于配合物的发射峰与孔雀石绿(MG)的吸收峰匹配,因此配合物的荧光能通过荧光共振能量转移(FRET)被MG猝灭。在加入5μmol/L MG前后配合物荧光寿命分别为572μs、450.92μs,量子产率分别为9.49%和5.21%。FRET效率为0.21,X射线衍射(XRD)图谱表明配合物有良好的的晶体性能。以荧光强度和荧光猝灭效率为指标,优化配合物对MG的荧光测试条件。在优化条件下配合物对MG的响应时间仅5 min,与氯霉素等禁用渔药相比,该配合物对MG的猝灭程度最大,表明其对MG具有较好的选择性。线性范围为0.5-20μmol/L,检出限为117.3 nmol/L(3σ/S,n=9)。利用该配合物检测养殖水中的MG残留,加标回收率在96.10%-98.76%间,表明所制备的稀土配合物荧光探针可用于养殖水中MG的快速检测。稀土配合物是一种优良的荧光物质,将其用于食品分析领域的研究并不多,本文首次将Eu配合物用于MG的荧光检测,利用FRET效应检测MG,配合物的制备过程简单,检测过程简便迅速,为MG的快速检测提供了一种新思路。第二部分,分子印迹聚合物制备简单,具有良好的化学性能,在食品分析等领域广受人们的关注。Si O2因其表面富含硅羟基官能团,易于功能化,在化学分析等领域应用广泛。本文采用沉淀聚合法,以隐性孔雀石绿(LMG)为模板,甲基丙烯酸(AM)为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂,改性二氧化硅(Si O2)为核,稀土荧光配合物Eu(Maa)3Phen为荧光物质,在LMG与AM与EGDMA的摩尔比为1:4:10,稀土配合物为15 mg,乙腈60 m L的条件下,制备了一种孔雀石绿分子印迹聚合物,并对其吸附性能、荧光性能、选择性等进行了研究。结果表明,优化条件下聚合物对MG的线性范围为0-20μmol/L,F0/F与MG浓度呈现良好的线性关系,线性方程为F0/F=1.008C+0.344(0.1-1μmol/L,R2=0.991),F0/F=0.587C+0.570(1-20μmol/L,R2=0.999),检出限为0.037μmol/L(3σ/S,n=9),将其作为荧光探针应用于鱼肉中MG的检测,加标回收率在95.61%-102.51%范围内,表明所制备的荧光探针可快速准确地检测鱼肉中的MG残留。第三部分,研制了一种基于稀土配合物的荧光分析试纸用于MG的现场快速可视化检测,将稀土配合物溶液吸附在试纸材料上,制备一种MG的荧光分析试纸。以稀土配合物Eu(Maa)3Phen乙醇溶液为荧光物质,以定性滤纸、PTFE、醋酸纤维膜、微孔滤膜为试纸材料进行优化,优化后选用微孔滤膜为试纸材料;配合物浓度为0.04 mg/m L;试纸条在荧光溶液中浸入时间为15 min。在紫外灯照射下肉眼观察试纸片,试纸片发射红色荧光,当样品中存在MG时,稀土配合物发射的红色荧光逐渐被猝灭,样品中MG浓度越大,试纸片的荧光越弱。试纸条传感器因其具有可操作性强、不需要专业人员和大型仪器、所需样品量少,方便携带、可大大缩短检测时间,是目前备受关注的研究方向。本文创新性地将稀土配合物作为荧光物质吸附在试纸条上,通过肉眼观察试纸条的颜色变化,实现对样品中MG的可视化半定量检测,该方法成本低廉,操作简便,不需要大型仪器,为MG的现场快速筛查检测提供了一种新思路。
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