研究背景及目的:癌症是全球范围内诱发死亡的最主要因素,而由肺癌引起的死亡在所有癌症类型中占比最高。根据组织学分类可以将肺癌分为两类:小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）,其中 NSCLC 占比80%以上,五年生存率仅为23%。上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是指上皮细胞失去上皮特性包括细胞间的粘附、极性等,转变为侵袭性很强的间充质细胞的过程。转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路通过提高细胞侵袭能力、降解细胞外基质、减弱细胞间粘附以及促进EMT等过程从而促进癌症发生发展。RNF216（ring finger protein 216,环指蛋白216）作为RBR（RING-between-RING）E3泛素连接酶家族的成员之一,在先天免疫与自噬过程中都发挥着重要作用,但是RNF216与EMT的关系还有待进一步研究。本研究探讨了RNF216在NSCLC中的表达情况以及其与患者生存预后的关系、初步探究了 RNF216通过调控TGF-β信号通路影响EMT进程的机制。这将为NSCLC的临床诊断治疗以及充分了解NSCLC发生发展机制提供新的实验依据。研究方法:（1）通过下载、分析公共数据集 TCGA-LUAD（The Cancer Genome Atlas,TCGA）和GEO（Gene Expression Omnibus）的基因表达谱数据分析RNF216的表达情况以及与肺癌患者预后的关系。（2）通过过表达/敲降实验探究RNF216对NSCLC细胞EMT标志物的影响,并通过细胞划痕、Transwell、集落形成等实验探究其对迁移、侵袭以及增殖能力的影响。（3）以TCGA-LUAD基因测序数据集进行RNF216单基因集富集分析（Gene set enrichment analysis,GSEA）找到与RNF216表达密切相关的信号通路,并进行实验验证。（4）检测RNF216对TGF-β信号通路的关键信号转导蛋白表达的影响,并通过剂量依赖实验以及蛋白质半衰期实验验证。（5）共转染泛素、RNF216以及靶基因检测RNF216对靶基因编码蛋白的泛素化修饰水平的影响。（6）稳敲RNF216后回复SMAD3的表达水平,检测RNF216发挥促进EMT的功能是否依赖于SMAD3。研究结果:（1）在NSCLC患者中,RNF216的mRNA表达水平上升且与预后不良密切相关。（2）RNF216能促进NSCLC细胞系的迁移与侵袭能力,但是对细胞增殖能力没有影响。（3）RNF216单基因GSEA富集分析表明RNF216与TGF-β信号通路显著相关且RNF216能促进TGF-β1诱导的EMT过程。（4）RNF216在翻译后水平调控TGF-β信号通路关键蛋白SMAD3的稳定性。（5）RNF216能抑制SMAD3的泛素化修饰。（6）RNF216发挥促进EMT的功能依赖于其对SMAD3稳定性的影响。研究结论:此项研究表明RNF216在NSCLC中表达显著升高且与预后不良密切相关,并能促进NSCLC细胞的迁移与侵袭。RNF216能通过抑制SMAD3的泛素化修饰水平继而促进SMAD3的稳定性,继而促进TGF-β诱导的EMT进程。