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链霉素(SM)是一种氨基糖甙类抗生素,在医学上由于其存在严重的耳及肾毒性,已被其它新药所取代。但在畜禽疾病防治方面,该药对奶牛乳房炎、子宫内膜炎、鸡传染性鼻炎等有很好的疗效,仍是常用药物之一。但由于不规范用药常会引起畜禽产品中的超标残留,对人类的健康构成潜在危害。为探索并建立一种能够快速有效地检测链霉素残留的方法,本研究采用单克隆抗体技术和胶体金免疫层析技术,合成并制备了人工抗原、抗链霉素单克隆抗体和胶体金,采用竞争法建立了检测SM残留的GICA方法,成功研制了链霉素胶体金免疫层析试纸条,试纸条灵敏度、特异性、稳定性等均达到检测要求。本研究将杂交瘤细胞株5C10接种到小鼠体内,采用体内诱生腹水法制备了含抗链霉素单抗的腹水。腹水经辛酸-硫酸铵法纯化后用全抗原对单抗进行质量鉴定,单抗蛋白质浓度为4mg/mL,抗体效价为1?1.6×105, IC50为102.28ng/ml。单抗特异性较好。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金标记抗体经纯化后吸附在玻璃纤维素膜上;将Str-OVA(检测线)和羊抗鼠IgG(质控线)分别包被在硝酸纤维素膜上。分别经过处理干燥后与样品垫、吸水纸组装成试纸条。本实验选用直径18nm左右的胶体金标记的单抗作为检测试剂,单抗加入量15μg/mL,采用进口Ahlstrom8964玻璃纤维膜作为金吸附材料,Millipore135硝酸纤维素膜作为层析材料制成试纸条。本研究对链霉素胶体金免疫层析试纸条的各项指标进行优化,并确定了最佳条件,成功建立胶体金免疫层析检测链霉素残留的方法。使用试纸条对SM标准液检测,检测限为100ng/ml。试纸条对对新霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、恩诺沙星、氨苄青霉素、磺胺喹噁啉无交叉反应。初步建立了牛奶、奶粉、蜂蜜等样本的样品处理方法,并用ELISA方法和试纸条进行验证。结果表明试纸条能够基本满足检测要求。试纸条最大的优点是无需借助检测仪器,检测所需试剂已包被在试纸条上,检测快速、简便,10min内可出检测结果,适用于对链霉素残留进行现场检测。本研究也为其他兽药残留检测试纸条的研制提供了借鉴。