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禽白血病（AL）是由禽白血病病毒（ALV）引起恶性或良性肿瘤的一类可传染的肿瘤性疾病。根据宿主范围、囊膜蛋白特异性等将其分为AJ 10个亚群。2012年,从我国地方品系鸡中分离到新的ALV亚群即K亚群（ALV-K）,近年来该病毒在地方品系鸡中的分离率越来越高。ALV-K复制能力弱,以致于在过去净化检测中易被漏检,其具体感染和致病机理尚不清楚。本课题组前期研究中,在我国华南地方品系鸡中分离到3株ALV-K（GDFX0601、GDFX0602、GDFX0603）,对其进行基因序列分析发现,这3株ALV-K分离株的LTR核苷酸序列与E亚群ALV的序列相似性高达98.5%,而与其他亚群参考毒株仅为65%。本课题组又基于荧光素酶表达活性对不同亚群ALV 5’LTR序列研究后发现ALV-K（GDFX0601）5’LTR序列启动活性显著低于其他亚群,但不太清楚其LTR对ALV-K复制能力和致病性的影响。本研究以ALV-K（GDFX0601）前病毒DNA为模板分两段扩增目的片段,后依次克隆至载体pBluescriptⅡKS（+）中获得重组质粒pB-GDFX0601,再利用搭桥PCR法将致病性强的ALV-J（CHN06）的两端LTR替换至ALV-K的两端LTR构建ALV-K LTR突变体重组质粒pB-HN-GDFX0601。将重组质粒分别转染DF-1细胞后对细胞上清进行ALV p27抗原ELISA检测,并盲传3代后进行RT-PCR、IFA及Western Blot验证。ELISA结果显示S/P值分别为0.8和1.25（S/P值≥0.2为阳性）,且RT-PCR方法检测到ALV-K gp85及LTR;IFA检测结果显示感染组可见绿色荧光,非感染对照组无绿色荧光信号;Western Blot以ALV-p27抗体为一抗检测,结果显示感染组有清晰的蛋白条带,而对照组无条带,表明rGDFX0601和HN-GDFX0601拯救成功且具有生物学活性。为了研究LTR在ALV-K体外复制能力的影响,将rGDFX0601和HN-GDFX0601分别接种于24孔细胞板DF-1细胞中,并以亲本毒株ALV-K（GDFX0601）和ALV-J（CHN06）为阳性对照,吸取感染后17 d的细胞上清进行ALV p27 ELISA检测并绘制复制动力学曲线,结果显示rGDFX0601与ALV-K（GDFX0601）复制能力相似为最弱,ALV-J（CHN06）最强,而HN-GDFX0601介于两者之间,其强度次序为:ALV-J（CHN06）>HN-GDFX0601>rGDFX0601≈ALV-K（GDFX0601）,结果表明源于ALV-J的LTR替换能提高ALV-K（GDFX0601）在DF-1细胞上的复制能力。为了进一步明确LTR对ALV-K致病性的作用,本研究将150只1日龄SPF鸡随机均分为5组,分别经腹腔注射103TCID50的rGDFX0601、HN-GDFX0601、ALV-K（GDFX0601）和ALV-J（CHN06）,第5组注射等量的DMEM培养液作为阴性对照组。通过比较分析不同病毒感染对SPF鸡体增重和免疫器官的影响、病毒血症和泄殖腔排毒动态变化以及感染中后期鸡群血清中IL-6和IFN-γ的表达情况,以评价LTR对ALV-K致病性的作用。结果显示,LTR突变后并没有提高ALV-K对SPF鸡增重、免疫器官的影响。LTR突变后泄殖腔排毒仅在第6、7周有一过性的阳性排毒,而rGDFX0601株除第2、7周外均有阳性排毒;但LTR突变后鸡只病毒血症阳性多于突变前。血清细胞因子检测结果显示,LTR突变株感染在35d的IFN-γ水平高于克隆株1.68倍,而IL-6水平低于克隆株1.17倍,但在56 d的IFN-γ及IL-6水平均低于突变前。结果表明,源于ALV-J的LTR替换并不能提高ALV-K对SPF鸡的致病性。本研究为进一步阐明ALV-K致病性弱的分子机制提供了科学依据。