硝唑尼特抗PRRSV作用的初步研究

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)属于巢病毒目、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属,是一种对仔猪危害较大且引起猪生殖系统和呼吸系统疾病的病原体。其主要在呼吸道和血液中增殖,主要症状表现为呼吸困难、精神沉郁、繁殖障碍、皮肤出现蓝紫色斑块等。目前,此病无特效治疗药物,疫苗接种对变异毒株起到的保护作用有限,因此抗病毒药物的研究将为未来该病防控奠定科研及应用基础。在本研究中,首先通过体外试验验证当硝唑尼特(NTZ)浓度在0.625~10μM时与Marc-145细胞孵育48、72 h后细胞活力均大于50%,之后发现20μM NTZ可显著降低PRRSV VR2332、GSWW2015、GSWW2018株病毒RNA转录水平和病毒滴度。通过间接免疫荧光试验、RT-q PCR和TCID50等检测,测得NTZ对PRRSV VR2332、GSWW2018株的EC50值分别为3.856μM和1.326μM。利巴韦林(RBV)是经典的广谱抗病毒药物,通过零合交互能作用(ZIP)模型发现NTZ与RBV联合使用时具有拮抗作用。综上所述,NTZ对PRRSV具有体外抗病毒作用。通过建立PRRSV绝对荧光定量RT-q PCR检测方法检测动物排毒量及组织病毒载量。前期构建质粒经测序正确后用于后续试验,反应条件优化后在Tm=(84.5±0.2)℃出现单一峰,拷贝数与CT值的线性回归方程为:CT=-3.6561×log X(拷贝数)+41.816,相关系数为0.998,扩增效率为106.864%。此检测方法检测CSFV、PRV、PCV均无荧光产生,说明此检测方法特异性良好;同一试验中进行双标曲检测发现两条标准曲线处于平行关系,拷贝数在10~6和10~2时变异系数分别为0.312%、0.363%,说明此检测方法重复性良好。综上所述,建立PRRSV绝对荧光定量RT-q PCR检测方法可用于后续动物试验。之后,实验猪攻毒后同时口服25 mg/kg的NTZ悬液,以评价NTZ对PRRSV的抗病毒作用。结果发现,口服NTZ后可减轻PRRS的临床症状,第14 d时体重比0 d时提高15%,存活率比Mock组提高100%,口鼻排毒量比Mock组降低6.6×10~4Copies/μL以上,淋巴结组织病毒载量比Mock组降低1×10~6 Copies/μL以上。综上所述,NTZ可作为临床上抗PRRSV感染的候选药物之一,并为巢状病毒目或动脉炎病毒科其他成员所致疾病的治疗提供参考依据。
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