豚鼠气单胞菌（Aeromonas caviae）是水产养殖常见的细菌性病原体,豚鼠气单胞菌病具有流行广、发病快、死亡率高等特点,常常造成养殖渔业的巨大经济损失,严重危害渔业及其它水产业的发展。目前国内外有关豚鼠气单胞菌鱼病的的诊断主要依靠临诊病理观察及细菌学鉴定,两种方法在准确性及检测速度上均有一定限制。鉴于此,本文采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒,选择20nm的胶体金颗粒,标记抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体并制备胶体金垫。将胶体金垫、喷涂有豚鼠气单胞菌兔多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜、样品垫及吸收垫等组装成免疫层析试纸条,建立豚鼠气单胞菌的快速检测方法。用灭活细菌与血清混合的模拟样本测定试纸条的特异性、灵敏度。结果显示,试纸条对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌等7种常见病原菌均无交叉反应,与豚鼠气单胞菌显示特异反应,检测灵敏度为10⁶cfu.ml^-1,显示时间小于5min。研制的豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高、适用于基层临床生产推广应用。为豚鼠气单胞菌病的检测及防治提供新的技术方法。具体实验方法及结果如下:（1）通过动物免疫、细胞融合、筛选、克隆化及利用ELISA检测技术,制备并鉴定抗豚鼠气单胞菌的单克隆抗体（mAb）。共得到3株能稳定分泌mAb的细胞株,分别命名为:0E10、1C4和1F10。亚类鉴定显示:0E10属于IgG1,1C4和1F10属于IgG2a,Balb/c小鼠腹水中mAbs效价范围为2.56×10^-4～5.12×10^-5:交叉实验结果显示各株单克隆抗体与气单胞菌属内另两种常见致鱼病性细菌嗜水气单胞菌、温和气单胞菌,以及其他四种常见致病性细菌鳗弧菌、迟缓爱德华菌、创伤弧菌、溶藻弧菌等均不发生交叉反应,表明所制备的各株单克隆抗体均具有较好的特异性,可用于豚鼠气单胞菌的检测及进一步的研究。（2）采用柠檬酸三钠法制备了20nm的胶体金颗粒,并对1F10抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体进行胶体金颗粒标记,形成金标抗体。金标抗体喷涂在玻璃纤维素膜上,干燥制备释放性好、生物活性高的金标抗体结合垫。（3）将抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体与羊抗鼠抗体分别喷吐在硝酸纤维素膜的检测线和质控线位置,并对空白位点封闭,干燥,制备免疫硝酸纤维素膜。（4）试纸条的组装:将金标抗体结合垫、免疫硝酸纤维素膜、样品垫、吸收垫依次重叠粘在不干胶底板上,裁成小条,密封包装成免疫层析试纸条。（5）试验条的检测应用:在样品垫上滴加样品,样品在毛细吸附作用下向前层析迁移,在层析迁移的过程完成免疫学反应。若样品为阳性样品,则在检测线位置形成多克隆抗体—豚鼠气单胞菌—金标单克隆抗体免疫复合物并显色,质控线位置形成羊抗鼠抗体—金标单克隆抗体免疫复合物并显色:若样品为阴性则检测线不形成免疫复合物不显色,质控线仍然显色;若质控线不显色则试纸条失效。综上所述,本研究利用杂交瘤技术制备出多株抗豚鼠气单胞菌的单克隆抗体,对1F10单克隆抗体进行了胶体金标记,建立了金标快速检测方法,制备了豚鼠气单抱菌胶体金免疫层析快速检测试纸条。豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制在国内外迄今未见报道,本文首次建立了该方法。