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C反应蛋白（CRP）与降钙素原（PCT）都是炎症早期诊断的重要标记物,本课题采用自制的梳状两亲性聚合物包裹油溶性核壳型荧光量子点制备的水溶性核壳型量子点做为发光材料,应用于免疫层析技术平台制备体外诊断试纸条。该试纸条由核壳型荧光量子点作为标记物标记一抗,将二抗包被在硝基纤维膜上,制备量子点免疫层析试纸条。运用双抗体夹心法原理,借助干式免疫荧光读数仪根据硝基纤维膜上的检测线（T线）的荧光强度对炎症感染进行定量检测。并对制备的CRP量子点免疫层析试纸条和CRP/PCT二联量子点免疫层析试纸条的检测性能进行检测。第一部分综述综述分为3个部分:第一部分主要是介绍了即使检验（POCT）的发展状况、以及目前POCT的常用技术等;第二部分是介绍了量子点的基本性质与特性、量子点的发展、现有的量子点的制备方法、量子点免疫层析技术的原理、分类和应用以及在免疫层析中量子点作为发光材料的优点;第三部分介绍了CRP和PCT可作为诊断炎症的原因以及意义、目前检测CRP和PCT的方法以及CRP和PCT联合诊断的意义。第二部分水溶性量子点的改性以及量子点免疫层析试剂条处方工艺的研究本部分由亲水性较好的甲氧基聚乙二醇胺(m PEG2000-NH2)和亲油的聚（马来酸酐-alt-1-十八烯）通过酰胺反应制备成梳状两亲性聚（十八烷基-alt-聚乙二醇）。由其包裹核壳型无机油溶性ZnCdSe/ZnS量子点,制备成了粒径均一、稳定性好、灵敏度高的核壳型水溶性量子点。在制备试纸条的过程中,对量子点与标志物一抗偶联物与标志物二抗包被浓度,以及偶联复合物的使用量进行了单因素考察以及分析样品垫和结合垫预处理液等进行了优化。确定了在量子点-CRP一抗复合物的偶联过程中,量子点使用量为10μL,偶联剂1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺（EDC）使用量为7.6μg,N-羟基丁二酰亚胺（NHS）使用量为8.7μg,抗体时用量为12μg,封闭液使用量为15μL的10%牛血清蛋白（BSA）,NC膜的制备中包被量为0.5 mg/mL,划线速度为0.7μL/cm,量子点-CRP一抗复合物的划金速度为0.5μL/cm;在量子点-PCT一抗复合物的偶联过程中,量子点使用量为10μL,偶联剂EDC使用量为7.6μg,NHS使用量为44μg,抗体时用量为18μg,封闭液使用量为10μL 10%BSA,包被量为1.5 mg/mL,划线速度为0.7μL/cm,量子点-CRP一抗复合物的喷金速度为6μL/cm;样品垫和结合垫的处理液配方为PB含量为20 m M、Tween-20含量为0.5%、Casein含量为0.5%、聚氧乙烯20油醚含量为0.5%、HBR-5含量为0.03 mg/mL、HBR-7含量为0.02 mg/mL。第三部分CRP量子点免疫层析试纸条性能指标的检测本部分制备了量子点-CRP一抗偶联物,并通过紫外和荧光光谱、斑点实验以及琼脂糖凝胶电泳等对其进行表征。表征结果显示制备的量子点-CRP一抗复合物符合制备免疫层析试纸条的要求。制备CRP量子点免疫层析试纸条并对其性能指标进行检测,即对其层析速度、线性范围、最低检测限、精密度、稳定性等进行检测。检测结果:试纸条的层析速度为14.81 mm/min,线性范围为0.19～100 mg/L、最低检测限为0.13 mg/L,批间精密度与批内精密度均小于15%,样本中的Na+、K+和EDTA对检测结果无影响,且制备的CRP量子点免疫层析试纸条在25℃以下有良好的稳定性。与市售免疫荧光试纸条进行对比,自制得CRP量子点免疫层析试纸条能检测到0.13 mg/L,而市售免疫荧光试纸条只能检测到0.5mg/L,故自制的CRP量子点免疫层析试纸条的灵敏度较好,与临床检测结果相比CRP的检测结果R~2=0.9979,即具有较好的准确度。第四部分CRP/PCT二联量子点免疫层析试剂条的制备和性能指标检测本部分对制备的量子点-PCT一抗偶联物并通过紫外和荧光光谱、斑点实验以及琼脂糖凝胶电泳等对其进行表征。表征结果显示制备的量子点-PCT一抗偶联物作为制备免疫荧光试纸条的要求。CRP/PCT二联量子点试纸条的制备中,由于正常人体内的CRP和PCT浓度水平不同,为解决样品稀释问题,量子点-CRP一抗复合物以划线的工艺均匀划在硝基纤维膜上,而量子点-PCT一抗复合物采用喷金的工艺均匀的喷涂在结合垫上,有效解决了检测时样品的稀释问题。在硝基纤维膜上同时包被CRP二抗和PCT二抗,将试纸条组装制备CRP/PCT二联量子点试纸条,并对其性能指标进行检测,即对其层析速度、线性范围、最低检测限、精密度、稳定性等进行检测。检测结果:通过干扰实验证明自制的试纸条检测这两种蛋白时,彼此之间没有相互干扰。试纸条的层析速度为14.95 mm/min;通过对其线性进行检测,CRP的线性范围为0.39～100 mg/L、PCT的线性范围为0.19～200 ng/mL;试纸条检测CRP的最低检测限为0.197mg/L,PCT的最低检测限为0.04 ng/mL;试纸条的批间精密度与批内精密度均小于15%,故试纸条具有良好的精密度;样本中的Na+、K+和乙二胺四乙酸（EDTA）对检测结果无影响;制备的CRP/PCT量子点免疫层析试纸条在25℃以下有良好的稳定性。与市售免疫荧光试纸条进行对比,自制的CRP/PCT量子点免疫层析试纸条检测CRP能检测到0.197 mg/L,检测PCT能检测到0.04 ng/mL,而市售免疫荧光试纸条检测CRP只能检测到0.5 mg/L,检测PCT能检测到0.1 ng/mL,故自制的CRP量子点免疫层析试纸条的灵敏度较好;与临床检测结果相比CRP的检测结果R~2=0.9972,PCT的检测结果R~2=0.9981,即具有较好的准确度。