[目 的]以被覆慢病毒标记的胆管上皮细胞的脱细胞动脉基质修复胆道缺损,在不同时点获取标本,观察修复后的胆道内细胞在脱细胞基质内的生长情况。为脱细胞动脉基质修复胆道缺损的临床应用提供新的理论及应用基础。[方 法]使用pHBLV-CMV-mcs-EF1-ZsGreen-T2A-luc慢病毒标记猪胆管上皮细胞,并用CCK-8法检测细胞生长情况并绘制生长曲线。采用标记的猪胆管上皮细胞与人源脱细胞基质复合培养,制备复合上皮组织,植入动物体内修复胆道缺损。随机将6只滇南小耳猪分为实验组和对照组,每组3只;实验组使用慢病毒标记的胆管上皮细胞与人源脱细胞动脉基质复合生长补片进行肝外胆道缺损修复,对照组采用人源脱细胞动脉基质补片进行进行修补。术后分别于1周、2周、4周各处死一只实验组和对照组动物,取修复后的胆总管组织进行常规切片、HE染色观察组织形态特点,并进行荧光定量PCR及Western Blot观察相关指标的表达变化。观察修复后的胆道内细胞在脱细胞基质内的生长情况。[结 果]pHBLV-CMV-mcs-EF1-ZsGreen-T2A-luc标记的胆管上皮细胞与未标记的对照组相比,细胞增殖生长状况无明显差异,且细胞生长呈持续性,其生长曲线表现为逐渐升高,并未表现出生长一段时间后的生长受限而导致生长曲线呈“S”形,这与细胞培养过程中的直接观察结果相符合。种植于脱细胞动脉基质1周后,扫描电镜观察胆管上皮细胞,可见少量胆管上皮细胞附着于基质表面以及基质内膜面裸露的胶原纤维。种植2周后,扫描电镜观察胆管上皮细胞已部分覆盖了基质内膜面,但仍有大部分脱细胞动脉基质未被覆盖。种植3周后,扫描电镜观察胆管上皮细胞已覆盖了基质内膜面的大部分。胆管上皮细胞种植4周后,已基本覆盖1x1cm2大小的基质内膜面,未见基质内膜面裸露的胶原纤维。选取种植4周的复合组织作为实验组修补补片。实验组GFP基因表达随着时间增长而增强,对照组未检出GFP基因。实验组与对照组CK7、CK19、GGT基因表达均随着时间增长而增强;同一时间点,实验组与对照组CK7、CK19、GGT基因相对表达量相比,P<0.05,差异有统计学意义,实验组相对表达量高于对照组。实验组GFP蛋白表达随着时间增长而增强,对照组未检出GFP蛋白。实验组与对照组CK7、CK19、GGT蛋白表达均随着时间增长而增强;同一时间点,实验组与对照组CK7、CK19、GGT蛋白相对表达量相比,P<0.05,差异有统计学意义,实验组蛋白相对表达量高于对照组。[结 论]慢病毒标记的胆管上皮细胞与空白细胞增值生长状况无明显差异,标记可以长期有效,且能稳定长期表达GFP,可对目的细胞在活体动物内进行有效示踪。人源异种脱细胞动脉基质与滇南小耳猪肝外胆道组织具有良好的组织相容性,在修复滇南小耳猪肝外胆道缺损后,能够作为细胞外支架,部分重建缺损的胆道组织,使胆道上皮再生并覆盖脱细胞动化基质表面。胆管上皮细胞可以加快缺损的修复过程,被覆胆管细胞的脱细胞动脉基质在整个修复过程中起到积极作用。