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目的:探讨缺血性脑梗死颈髓水平皮质脊髓束重塑的启动机制及复健片的脑外作用靶点,为从髓论治中风病提供全新的实验支持。
方法:制备大脑中动脉闭塞(MACO)大鼠模型。采用免疫组化自由漂片染色法对BDA组大鼠颈髓进行BDA染色标记,观察颈髓梗死侧及对侧皮质脊髓束(CST)纤维数;横木行走实验(BWT)评估各组大鼠运动功能;Western Blot法检测大鼠颈髓GAP-43、BDNF、NGF蛋白表达;免疫荧光法检测大鼠颈髓Nogo-A、NgR蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠颈髓GAP-43mRNA、BDNF、NGF、PKA-C mRNA表达;ELISA法检测大鼠颈髓cAMP含量。
结果:术后2周末,模型组和药物组梗死侧阳性CST神经纤维明显多于假手术组(P<0.05),且药物组表达多于模型组(P<0.01);术后1、2周末,与假手术组相比,模型组和药物组颈髓均高表达BDNF、NGF、cAMP、PKA-C(P<0.05),且药物组表达高于模型组(P<0.05);而在模型组、药物组Nogo-A、NgR蛋白表达均低于假手术组,其中药物组低于模型组。同时,模型组和药物组BWT评分也有显著改善,药物组改善更为明显。术后2周末,药物组和模型组大鼠梗死侧颈髓GAP-43蛋白表达较之假术组均有明显提升(P<0.05),但于术后1周末三组之间并无差异(P>0.05)。
结论:局灶性脑梗死后,支配前肢运动的颈髓由于失神经支配而短时间上调BDNF、NGF表达,同时在一定时间内激活cAMP PKA通路,抑制Nogo-A-NgR信号通路的传导,从而自发完成一定程度的皮质脊髓束重塑。复健片可进一步增强脑梗死后颈髓水平BDNF、NGF表达,上调cAMP、PKA-C含量,抑制颈髓Nogo-A、NgR表达,最大程度地实现功能性的CST重塑,从而促进缺损神经功能的恢复。
方法:制备大脑中动脉闭塞(MACO)大鼠模型。采用免疫组化自由漂片染色法对BDA组大鼠颈髓进行BDA染色标记,观察颈髓梗死侧及对侧皮质脊髓束(CST)纤维数;横木行走实验(BWT)评估各组大鼠运动功能;Western Blot法检测大鼠颈髓GAP-43、BDNF、NGF蛋白表达;免疫荧光法检测大鼠颈髓Nogo-A、NgR蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠颈髓GAP-43mRNA、BDNF、NGF、PKA-C mRNA表达;ELISA法检测大鼠颈髓cAMP含量。
结果:术后2周末,模型组和药物组梗死侧阳性CST神经纤维明显多于假手术组(P<0.05),且药物组表达多于模型组(P<0.01);术后1、2周末,与假手术组相比,模型组和药物组颈髓均高表达BDNF、NGF、cAMP、PKA-C(P<0.05),且药物组表达高于模型组(P<0.05);而在模型组、药物组Nogo-A、NgR蛋白表达均低于假手术组,其中药物组低于模型组。同时,模型组和药物组BWT评分也有显著改善,药物组改善更为明显。术后2周末,药物组和模型组大鼠梗死侧颈髓GAP-43蛋白表达较之假术组均有明显提升(P<0.05),但于术后1周末三组之间并无差异(P>0.05)。
结论:局灶性脑梗死后,支配前肢运动的颈髓由于失神经支配而短时间上调BDNF、NGF表达,同时在一定时间内激活cAMP PKA通路,抑制Nogo-A-NgR信号通路的传导,从而自发完成一定程度的皮质脊髓束重塑。复健片可进一步增强脑梗死后颈髓水平BDNF、NGF表达,上调cAMP、PKA-C含量,抑制颈髓Nogo-A、NgR表达,最大程度地实现功能性的CST重塑,从而促进缺损神经功能的恢复。