目的:基因组甲基化水平与细胞增殖、凋亡及肿瘤发生、发展密切相关。10-11易位蛋白(Ten-eleven translocation,TET)通过氧化5甲基胞嘧啶(5m C)参与DNA去甲基化。因此,寻找体外或体内特异性调节TET蛋白酶活的方法对于细胞增殖及肿瘤发生发展的研究具有重要的指导作用。本研究为了TET蛋白特异性激活剂或抑制剂的筛选,优化了TET蛋白氧化活性的体外检测方法,即高分辨率溶解曲线(high resolution melting,HRM);为了在细胞水平上验证TET蛋白特异性激活剂或抑制剂,建立TET蛋白的过表达细胞系;同时,通过使用建立的TET蛋白过表达细胞系,研究了TET蛋白对于细胞周期、增殖和凋亡的影响。方法:为了TET蛋白特异性激活剂或抑制剂的筛选,我们将p CDF-His-m Tet1CD质粒转化至大肠杆菌E.coli B21中,收集并纯化E.coli B21中表达的TET1蛋白,并使用Western Blot和DNA Dot Blot分别检测纯化的TET蛋白和TET蛋白的氧化活性。同时,我们在HRM中试验了不同的DNA长度、DNA量、荧光染料SYBR Green I浓度、缓冲液的条件对HRM的影响。为了细胞水平上验证TET蛋白特异性激活剂或抑制剂,我们在体外构建TET过表达的质粒,然后将其通过细胞转染的方法导入细胞后,使用抗生素筛选方法获得TET蛋白过表达的稳转细胞系。并且使用Western Blot和DNA Dot Blot方法分别验证稳转细胞系内TET1蛋白的表达和TET蛋白的氧化活性。另外,我们通过流式细胞术和细胞计数分别检测TET1蛋白对细胞周期、凋亡以及增殖的影响。结果:Western Blot和DNA Dot Blot结果显示从大肠杆菌E.coli B21获取到具备氧化活性的TET1蛋白。HRM条件优化的结果显示使用50 ng、长度为100 bp的DNA,含10×SYBR,盐离子浓度为25m M TAPS-HCl,2m M Mg Cl2,50m M KCl的缓冲液条件下,可获取较满意的溶解曲线。成功获得可诱导型TET蛋白过表达的HEK293T细胞系。对于HEK293T(Tet1CD)细胞系进行Western Blot和DNA Dot Blot验证,证实HEK293T(Tet1CD)细胞中存在可诱导的、具有氧化活性的TET1蛋白。流式细胞术结果显示,TET1CD过表达促进了细胞凋亡(P<0.05)及增加G2时期细胞比例(P<0.05);细胞计数结果显示,TET1CD过表达抑制细胞增殖(P<0.0001)。结论:纯化到的、具氧化活性的TET1蛋白和HRM的条件优化对TET蛋白特异性激活剂和抑制剂的筛奠定了坚实的基础。此外,TET1蛋白可能通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期最终抑制细胞增殖,其对细胞增殖的影响为体外高效细胞培养提供又一思路。