【摘 要】
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该课题首先利用基因重组技术,选择hIGF-1作为目的基因、GFP作为标记基因,构建含有hIGF-1和GFP的真核表达载体pcGI,通过限制性核酸内切酶酶切和转染成纤维细胞鉴定真核表达载
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该课题首先利用基因重组技术,选择hIGF-1作为目的基因、GFP作为标记基因,构建含有hIGF-1和GFP的真核表达载体pcGI,通过限制性核酸内切酶酶切和转染成纤维细胞鉴定真核表达载体hIGF-1构建成功.然后在脂质体介导下,pcGI转染兔关节软骨细胞,经G418筛选,通过荧光显微镜、免疫细胞化学以及原位杂交检测证实GFP和hIGF-1在兔关节软骨细胞中获得了稳定、持续的表达,成功制备了基因工程化的关节软骨细胞.采用MTT和流式细胞仪检测IGF-1基因转染后的关节软骨细胞增殖能力提高,Ⅱ型胶原免疫细胞化学、透射电镜观察以及GAG含量测定显示IGF-1基因转染后能有效地维持软骨细胞表型.这种以IGF-1为目的基因、以软骨细胞为受体细胞所建立的基因工程化细胞,为将来IGF-1基因治疗软骨缺损奠定了坚实的基础.
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