论文部分内容阅读
毛色是山羊重要的经济性状,同时也是识别动物品种的重要标志,对山羊毛色遗传规律的研究,有利于获得育种目标所确定的或者市场所要求的毛色类型。miRNA是一类内源性、单链小分子RNA,通过与靶基因互补配对,从而导致靶基因mRNA的降解,抑制蛋白质的合成,最终参与机体多种生命活动。但目前这两者之间的研究较少,本试验旨在研究毛色相关miRNA及其靶基因在不同品种、不同月龄山羊皮肤中的表达,为探究miRNA对毛色形成的影响机制奠定基础,为解析毛色相关miRNA在山羊被毛颜色形成中的作用提供参考。首先,本试验选取饲养在西南大学种羊场的大足黑山羊、内蒙古绒山羊以及不同年龄阶段(0月龄、2月龄、6月龄和12月龄)的大足黑山羊内蒙古绒山羊杂交F1代山羊各6只,手术法采集其皮肤及毛发。测定不同品种、不同月龄山羊皮肤及毛发中黑色素含量以及黑色素在皮肤中的表达部位,同时利用荧光定量PCR测定miRNA及其靶基因在皮肤中的表达情况。之后利用Western blot及免疫组化研究靶基因在蛋白水平的表达情况及其蛋白在皮肤中的表达部位。主要研究结果如下:1、大足黑山羊皮肤及毛发中黑色素含量均显著高于内蒙古绒山羊(P<0.05),随着年龄增长杂交F1代山羊皮肤及毛发中黑色素含量呈现递减趋势。黑色素主要分布在毛囊及皮肤表皮层。2、毛色相关miRNAs在不同品种山羊皮肤中的表达规律不同,其中miR-129-5p在大足黑山羊皮肤中的表达显著低于内蒙古绒山羊(P<0.05);miR-544-5p在内蒙古绒山羊皮肤中的表达显著低于大足黑山羊(P<0.05);而miR-148a、miR-381-3p和miR-543-3p在二者皮肤中的表达无显著差异。3、miR-129-5p在不同月龄杂交F1代山羊皮肤中的表达随时间增长先升高后降低,且0月龄其表达显著低于其他三个时间点(P<0.05);miR-148a在不同年龄阶段杂交F1代山羊皮肤中的表达无显著差异;mi R-381-3p和miR-543-3p的表达随年龄增长无显著规律;miR-544-5p的表达随年龄逐渐降低,且0月龄其表达显著高于其他三个时间点(P<0.05)。4、靶基因TYR、FZD6、GSK3β、PLCB4、EDN1、CAMK2A和CAMK2G在大足黑山羊皮肤中的表达显著高于内蒙古绒山羊(P<0.05);MITF和EP00在二者之间的表达无显著差异。5、靶基因TYR、EDN1、EP300和CAMK2G的表达随F1代山羊年龄增长呈现递减趋势;MITF、PLCB4和CAMK2A的表达随F1代山羊年龄增长呈现先增长后降低的趋势;FZD6和GSK3β的表达无明显规律。6、TYR蛋白表达情况与其m RNA水平表达基本吻合,同样是在大足黑山羊皮肤中的表达高于内蒙古绒山羊(P<0.05),且其表达随杂交F1代山羊年龄增长逐渐减少。MITF蛋白在内蒙古绒山羊皮肤中的表达显著高于大足黑山羊(P<0.05),随着年龄增长其蛋白表达同样呈现递减趋势。7、TYR蛋白主要存在于皮肤毛囊及表皮层,与黑色素表达部位高度一致。结论:1、大足黑山羊内蒙古绒山羊杂交F1代山羊毛色随年龄增长逐渐变浅,其皮肤及毛发黑色素含量也逐渐减少。TYR表达活性会随着大足黑山羊内蒙古绒山羊杂交F1代山羊年龄的增长而逐渐降低,初步反映TYR对山羊毛色的形成起到重要调控作用。2、miR-129-5p对山羊毛色的调控起到重要作用,它主要通过靶向TYR来发挥其调节作用。