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肠道收缩及动力是在基本电节律的基础上发生的。肠道平滑肌细胞是肠动力的物质基础和源泉;而Cajal问质细胞则是基本电节律的起搏器和信息传播的整合中转站,将肠道神经元末梢发出的信号传送给平滑肌细胞。从而认为胃肠壁内神经运动末梢-肌间丛Cajal间质细胞-平滑肌细胞构成为胃肠动力基本功能单位(Basic functional unit of gastric motilty,BFUGM)。
内质网是真核细胞中蛋白质翻译、合成及Ca2+存储的场所,对内外环境(包括高钙离子浓度、低氧、酸中毒和低葡萄糖水平等)的变化极为敏感,其功能紊乱时出现错误折叠与未折叠蛋白在腔内聚集以及Ca2+平衡紊乱的状态,称为内质网应激(endoplasmic reticulumstress,ERS)。20世纪90年代以来,线粒体一直被视为细胞凋亡通路的中枢。而新的研究结果证明,内质网和线粒体共同调控细胞Ca2+紊乱,均在细胞凋亡信号通路起中枢作用[2],内质网应激在细胞损伤凋亡的发生发展过程中起着重要作用。
目的:实验观察严重烫伤大鼠24小时内结肠壁内神经运动末梢-肌间丛Cajal间质细胞-平滑肌细胞表达内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(78kDa glucose-regulated protein,GRP78)、内质网凋亡因子胱冬酶Caspase-12的变化,及其超微结构随时间改变情况,探讨内质网应激、凋亡在烫伤后肠道细胞损伤中的作用。
方法:雄性SD大鼠50只,随机分为烫伤组和对照组。烫伤组采用30%Ⅲ度烫伤大鼠模型,分别在伤后3h、6h、12h、24h(对照组禁食12小时后)取起始段结肠组织两份:一份在电镜下观察结肠超微结构并摄片,另一份采用免疫组化方法检测结肠壁内神经运动末梢-肌间丛Cajal间质细胞-平滑肌细胞中GRP78和Caspase-12的表达情况,观察组织细胞病理改变及分布范围。
结果:免疫组化显示细胞强染色主要在粘膜、环纵行肌之间的神经细胞及间质细胞,烫伤后3h组开始显著增高,与对照组比较有统计学差异(P<0.05),表达显示阳性(++);6h组达高峰,显示强阳性(+++),与其他各组比较均有统计学差异(P<0.05);12小时组仍高于对照组水平(P<0.05),表达阳性(++);24小时恢复至与对照组水平相当。Caspase-12表达在6小时出现弱阳性(+),与对照组比较有统计学差异(P<0.05);12小时表达阳性(++),且较6h组高(P<0.05);24h组仍表达弱阳性(+),较12h组降低(P<0.05);对照组未见Caspase-12表达。烫伤组与对照组比较在各时相超微结构有明显不同程度改变,主要表现为肠道的平滑肌细胞胞核异染色质增加,胞核周隙增宽,肌丝排列紊乱,胞质内较多溶解性大空泡,线粒体肿胀、空泡样变或溶解。肌间丛神经元及问质Cajal细胞线粒体肿胀,嵴溶解、固缩,粗面内质网扩张,并部分溶解。
结论:大鼠肠道缺血后启动内质网自稳调节系统,GRP78表达升高,过度内质网应激启动Caspase-12凋亡通路加重细胞损伤。严重烫伤后大鼠肠道肌间丛-Cajal间质细胞-平滑肌细胞存在明显病理改变,这与内质网过度应激启动Caspase-12凋亡通路可能存在一定联系。