新型乙酰胆碱酯酶活性检测法在重症肌无力患者中的应用

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重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)是一种自身免疫性疾病,是由自身抗体(Autoantibodies,Abs)引起突触后膜的形态和功能改变,导致神经与肌肉信号传递受阻而出现肌肉无力的疾病。重症肌无力的发病机制主要是乙酰胆碱受体抗体(Acetylcholine-receptor antibody,AChR-Ab)与乙酰胆碱受体(Acetylcholine receptor,AChR)结合,激活经典补体途径,形成膜攻击复合物(Membrane attack complex,MAC),导致突触后膜的AChR和相关蛋白破坏,从而影响神经递质乙酰胆碱(Acetylcholine,ACh)与突触后膜的相互作用,最终导致MG患者肌肉无力。ACh被乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)水解成其他成分,这些成分被突触末端再摄取并重新合成为ACh,因此MG患者的AChE活性检测具有重要临床意义。目前临床上大多采用三氯化铁分光光度法检测MG患者的AChE活性,但该方法操作比较费时,且不易控制实验条件,难以达到快速灵敏的检测效果。本研究开发一种新型的检测方法(改良DTNB法)来检测MG患者AChE活性,并评价其临床意义。目的:本研究使用改良DTNB法与常规检测方法(三氯化铁分光光度法)同期对MG患者进行AChE活性检测。探讨改良DTNB法在临床应用的可行性,同时证明AChE活性的改变可能是MG的发病机制之一,并说明检测MG患者AChE的临床意义。方法:本研究共纳入吉林大学中日联谊医院胸外科2019年10月至2022年2月诊治的46例患者,分为两组,一组为重症肌无力组16例,一组为对照组(肌力正常的其他胸部疾病患者)30例。收集研究对象的年龄、性别、胸腺状态、甲状腺病史、吸烟史、饮酒史等临床资料。我们将所有研究对象分别采用改良DTNB法和常规检测法(三氯化铁分光光度法)进行AChE活性检测。比较两种方法检测的AChE活性是否具有统计学差异,同时对比两组患者间AChE活性的差异。结果:使用改良DTNB法建立的AChE浓度与吸光度值之间的标准方程为y=1.32684x+0.03829(R2=0.99319)。两组患者间在年龄、性别、甲状腺疾病史、吸烟史、饮酒史上无显著统计学差异,P>0.05;在胸腺状态方面具有统计学差异,P<0.001。分别采用改良DTNB法和三氯化铁分光光度法测定所有样本的AChE活性,P>0.05,无统计学差异;两种方法均检测到MG组的AChE活性明显高于对照组,P<0.05,具有统计学差异。同时将两种检测方法得到的Ⅱa型、Ⅱb型、Ⅲ-Ⅳ型MG患者的AChE活性分别与Ⅰ型MG患者对比,改良DTNB法检测结果提示Ⅱa型、Ⅱb型、Ⅲ-Ⅳ与Ⅰ型对比均有明显差异;三氯化铁分光光度法检测结果提示Ⅱa型、Ⅱb型与Ⅰ型对比无统计学差异,只有Ⅲ-Ⅳ型与Ⅰ型对比有统计学差异。结论:证实了改良DTNB法与三氯化铁分光光度法检测性能相当,在灵敏性上优于三氯化铁分光光度法,特别是对于检测Ⅰ型、Ⅱa型、Ⅱb型等轻中症的MG患者,具备临床应用的可行性;证明胸腺异常(存在胸腺瘤和/或胸腺增生)与重症肌无力的发病有密切关系,为手术切除胸腺治疗MG提供理论依据;证实了AChE活性的改变可能是重症肌无力的发病机制之一,为使用乙酰胆碱酯酶抑制剂治疗重症肌无力提供理论依据;改良DTNB法可为MG围手术期提供一种快速、灵敏性高、稳定性与重复性均较好的AChE检测方法,未来可作为MG围手术期管理和疗效监测的有效手段。
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