膜乳化法制备微球型载体固定化酶

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lvbei2008
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酶催化反应过程中,由于游离酶存在难以与产物分离,不能忍受极端环境,并且不能回收重复利用等缺点,因此将酶进行固定化是比较重要的,这样不仅弥补了游离酶的缺点,并且也能大大地节约了成本。然而,在进行酶的固定化时,必须选择合适的载体,利用合适的方法,因为载体的结构特点和固定化方法对酶的活性有一定的影响,因此,选择合适的载体,并通过合适的方法将酶进行固定化有着重要的研究意义。本文利用明胶和二氧化硅为载体,通过SPG膜乳化法,制备了明胶微球和明胶/二氧化硅杂化微球,并分别通过两种微球进行固定乙醇脱氢酶(YADH)和过氧化氢酶(CAT),研究了两种固定化酶的pH稳定性、储存稳定性和循环使用稳定性。本论文的主要研究工作如下:第一,利用SPG膜乳化法制备了明胶微球和明胶/二氧化硅杂化微球,并对微球的粒径及形态进行了表征,探究了影响微球粒径及形态的因素。第二,利用SPG膜乳化法制备了明胶微球固定化酶和明胶/二氧化硅杂化微球固定化酶,利用固定化酶进行催化反应,并考察了固定化酶的催化活力。实验结果表明:制备明胶微球最佳的条件为:分散相浓度为0.1g/mL,分散相和连续相的体积比为1:6,转速为400rpm,过膜压力为(5-30) KPa,表面活性剂Span-80的浓度为1.5%,洗涤选用的试剂为异丙醇和丙酮,乳化的温度为55℃。明胶/二氧化硅杂化微球的表面比较粗糙,明胶微球表面涂敷了二氧化硅,并且含量为46.2%。热分析谱图表明明胶/二氧化硅杂化微球的热稳定性较明胶微球好。储存28天后。明胶微球固定化酶仍能维持40%的活力,并能多次循环使用。明胶/二氧化硅杂化微球固定化酶活力最高的pH值为6.0,储存21天后,杂化球固定化酶能维持高于50%的相对酶活力,明胶/二氧化硅杂化微球固定化酶循环使用7次后,仍能保持42.3%的相对酶活力。得到的结论为:通过SPG膜乳化法成功地制备出了粒径可控的明胶微球、明胶/二氧化硅杂化微球和微球型载体固定化酶。
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