【摘 要】
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天然免疫系统(innate immune system)的模式识别受体(pattern recognitionreceptors,PRRs)在抵御病原微生物感染、保护宿主中发挥重要作用。PRRs主要有三类,分别是:Toll样受体(
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天然免疫系统(innate immune system)的模式识别受体(pattern recognitionreceptors,PRRs)在抵御病原微生物感染、保护宿主中发挥重要作用。PRRs主要有三类,分别是:Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、RIG-Ⅰ样受体(RIG-Ⅰ-likereceptors,RLRs)和NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)。这些PRRs可以识别各种病原体及病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),诱导Ⅰ型干扰素和炎症细胞因子的表达,负责启动天然免疫反应。 泛素化与去泛素化修饰系统是宿主调控抗病毒反应的重要方式。而TRIM(tripartite motif protein)家族属于含有RING结构域的E3泛素连接酶大家族。越来越多的研究发现,TRIM家族蛋白具有调节天然免疫信号通路的能力或者展现出抗病毒特性,但是现在对于TRIM家族蛋白的研究仍较为有限。 为了寻找新的参与细胞抗病毒信号通路调控的TRIM蛋白,我们采用IFN-β启动子作为报告基因对TRIM家族进行筛选,筛选出能够负调控病毒诱导的Ⅰ型干扰素表达的TRIM9分子。瞬时转染TRIM9能够抑制IFN-β启动子、NF-κB和ISRE报告基因的激活,下调SeV诱导的Ⅰ型干扰素的表达。而下调细胞内TRIM9的表达,则显著促进SeV诱导的IFN-β及其下游基因的转录。 我们构建了一系列TRIM9的突变体来探究TRIM9负调控抗病毒信号通路的功能是否依赖E3泛素连接酶活性和RING结构域。结果发现,RING结构域是TRIM9发挥功能必须的,但是TRIM9几乎没有E3泛素连接酶活性,其负调控负调控病毒诱导的Ⅰ型干扰素表达的功能也不依赖E3泛素连接酶活性。我们进行了免疫共沉淀实验,发现TRIM9与IKKβ存在相互作用。进一步的研究证实,TRIM9可以抑制IKKβ的磷酸化从而参与负调控病毒诱导的Ⅰ型干扰素表达。
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