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目的:回顾性分析已纳入本研究但尚未进行基因诊断的9个骨硬化症家系/(无家系)先证者的临床资料;对所有临床诊断或者拟诊常染色体显性遗传骨硬化症的先证者进行CLCN7基因筛查。对于CLCN7基因筛查后未找到突变位点的先证者,再逐一筛查其余能导致骨硬化症的致病基因;对所有拟诊骨硬化症合并肾小管酸中毒的先证者进行CAII基因筛查,确定其突变位点及突变类型。对于临床及基因均已确诊的骨硬化症先证者,对其相应的突变蛋白进行功能预测,并尝试探讨其基因型和临床表型的相关性。方法:收集自2008年起北京协和医院内分泌科临床诊断或拟诊骨硬化症的9个家系/(无家系)先证者。⑴分析9个骨硬化症家系/(无家系)先证者的遗传方式,临床表现及影像学特征;⑵对9个骨硬化症家系先证者/(无家系)先证者及其家系中的亲属进行基因突变检测;拟诊常染色体显性遗传骨硬化症的先证者针对CLCN7基因进行PCR扩增测序;拟诊常染色体隐性遗传骨硬化症合并肾小管酸中毒的先证者针对CAII基因进行PCR扩增测序,如发现新的错义突变则在50例无关健康人群中进行验证;⑶选取遗传学已确诊的错义突变的骨硬化症先证者,应用蛋白预测软件Polyphen-2进行突变体蛋白功能预测,并探讨其基因型和临床表型的相关性;⑷对于遗传学确诊剪切位点突变的骨硬化症先证者,进行m RNA逆转录后RT-PCR分析,明确该剪切位点对于蛋白功能的影响。结果:1.本研究确诊了6例ADOⅡ患者和1例IARO患者,基因检测证实了8个CLCN7基因突变,其中2个(c.856C>T,p.R286W;c.637C>T,P.L213F)为已报道的突变;5个(c.1039G>A,p.G347R;c.976A>G,p.R326G;c.869C>A,p.S290Y;c.1691T>C,p.L564P;c.671T>G,p.L224R)为新发的错义突变,1个(p.L224R,p.K691FS)剪切位点的新发突变。该发现极大的扩大了CLCN7基因突变数据库。同时本研究总结并比较了CLCN7相关性的ADOⅡ和IARO患者分别在临床特征和基因分型方面的异同点,有助于提高临床医师对该种疾病的认识。2.本研究报道了中国首例CAII相关性骨硬化症,通过CAII基因检测证实了CAII基因的2个新发突变(c.T381G,p.Y127X,c.350+2T>C,IVS3+2T>C),丰富了CAII基因突变数据库。通过临床观察和分子生物学研究,提高了我们对于这种疾病的认识。然而,对于蛋白截短长度更短的CAII基因的无义突变或剪切突变可引起的更为恶性的临床表现,我们仅限于推测,还存在一定的局限性。因此,后续的研究应致力于收集更多的CAII相关性骨硬化症患者的临床资料去明确其基因型和表型的关系。结论:在本研究所纳入临床诊断或拟诊骨硬化症的患者中,最终确诊了CLCN7相关性骨硬化症ADOⅡ患者6例,CLCN7相关性骨硬化症IARO患者1例以及ARO合并RTA患者2例。共发现致病基因突变10个,其中CLCN7基因突变8个,包含两个已报道的错义突变(p.R286W,p.L213F);7个新发突变,其中6个为新发错义突变(p.L224R,p.S290Y,p.R326G,p.G347R,p.L564P),一个新发剪切位点的突变(p.K691FS)。CAII基因突变2个,均为新发突变,分别为c.350+2T>C,IVS3+2T>C剪切位点突变和c.T381C p.Y127X无义突变。将所有已证实的新发错义突变经过Ployphen2蛋白功能软件预测,均显示这些突变可严重损害蛋白编码的正常功能。本研究在中国人群中证实了CLCN7和CAII基因是骨硬化症的致病基因,并进一步丰富了骨硬化症相关致病基因数据库。