缓释微球体联合分区式组织工程脊髓导管的构建及测定

来源 :南通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanguangkai
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目的制备分区式导管(PtTS)和壳聚糖微球体(CMSs);利用CMSs包封血小板衍生生长因子(PDGF),并固定到PtTS中,联合多系分化持续应激细胞(Muse细胞)诱导分化形成的神经前体细胞(Muse-NPCs),构建新型的人工组织工程脊髓,为今后体内治疗修复脊髓损伤提供较好的材料制备方法。方法冷冻干燥法制备壳聚糖PtTS;乳化溶剂蒸发技术制备包封牛血清白蛋白(BSA)和PDGF的CMSs,扫描电镜观察分析CMSs的粒径尺寸,称重法检测CMSs的溶胀指数,BCA法检测CMSs的包封率,ELISA法检测CMSs的缓释曲线;密度梯度离心法和差速贴壁法从健康成人骨髓中分离出人骨髓基质细胞(h BMSCs),体外扩增后从h BMSCs中分离出Muse细胞,并通过神经诱导培养基体外诱导Muse细胞分化为Muse-NPCs;CMSs、PtTS分别与Muse-NPCs共培养,CCK-8法检测材料对细胞的生物学影响;利用CCK-8法、Transwell实验和免疫荧光细胞化学染色等方法观察PDGF对Muse-NPCs的增殖、迁移与分化作用;将Muse-NPCs接种至PtTS中,形态学观察PDGF对Muse-NPCs在其中的附着与生长作用。结果制备出的PtTS成管率高,内部孔隙率较好,适合CMSs的附着。CMSs呈球形,粒径尺寸分布范围合理,适合包封BSA、PDGF等生物大分子。检测CMSs以及分别包被3mg、6mg和12mg BSA的CMSs的溶胀指数,研究发现1~12h之内,4个组的溶胀指数不断上升,12h之后达到平衡。CMSs的包封率为72.33%±1.28%。28d时,CMSs中BSA的累积释放量约为17%。从h BMSCs中分离出Muse细胞,经过神经诱导培养基诱导生成的Muse-NPCs呈干细胞球团状悬浮生长,具有神经干细胞特征。PtTS、CMSs与Muse-NPCs共培养,生物相容性较好,无毒性作用。含有PDGF的神经诱导培养基能够促进Muse-NPCs的增殖、迁移,并促进其向神经元方向分化。PDGF联合PtTS形成复合支架,能够促进Muse-NPCs的附着与生长。结论成功制备出成管率较高、内部孔隙率较好的PtTS,以及粒径尺寸分布范围合理、适合包封BSA、PDGF等生物大分子的CMSs;将CMSs接种到PtTS中,两者结合良好。PDGF能有效促进Muse-NPCs的增殖、迁移以及向神经元方向的分化。将Muse-NPCs接种至PtTS中,PDGF能促进种子细胞在支架材料中的附着和生长,为今后采用新型的组织工程脊髓进行体内修复脊髓损伤打好基础。
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