基于反应型的荧光探针的设计、合成与应用研究

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近年来,荧光检测法因其操作简单、灵敏度高、检测限低、生物相容性好并能实现待测物的实时、在线监测等特点而在生物、临床、环境等领域得到了广泛应用。荧光探针主要包含络合型和反应型两类,相对于经典的络合型荧光探针,基于高度特异性化学反应的反应型荧光探针具有更好的专一性和更高的灵敏度,是目前荧光探针研究的热点。本论文正是基于此背景下开展的基于反应型的荧光探针的研究工作,设计了四个用于检测细胞内活性硫物种(Intracellular Reactive Sulfur Species, RSS)的荧光探针,论文的主要内容包括:(一)我们设计合成了一个新型的基于聚集态诱导荧光发射(Aggregation-induced Emission,AIE)机理的检测H2S的荧光探针S1(AIE-S)。S1在纯水溶剂中由于低溶解度而发生聚集,显示强的蓝色荧光,当加入Cu2+形成AIE-S-Cu后溶解性增加而导致荧光猝灭,而当再加入S2-反应后,又能释放出S1而使得荧光恢复,显示了明显的“on-off-on”型的荧光变化,对Cu2+和H2S均有优秀的选择性和灵敏度,成功应用于活细胞中H2S的实时检测。(二)我们设计合成了一个基于ICT机理的检测H2S的比率计型荧光探针S2。探针S2以4-羟基-1,8-萘酰亚胺为荧光团,4-叠氮苄基为报告基团,当加入H2S后,探针分子S2发生“叠氮还原—1,6-消除反应”这一串联反应而释放出4-羟基-1,8-萘酰亚胺,其紫外吸收从369nm红移到469nm,荧光发射从443nm红移到537nm,荧光量子产率从0.11增加到0.20,显示了良好的比率计型荧光变化,检测限为71.0nM。(三)我们设计合成了一个基于ICT机理的检测GSH的“off-on”型荧光探针S3。探针S3以萘酰亚胺为母体,对甲基苯磺酰基为报告基团,由于强吸电子性的磺酰基成功阻断了萘酰亚胺母环的ICT过程,探针几乎无荧光,荧光量子产率仅为0.08%,而当GSH存在时,S3发生芳环上的亲核取代反应,巯基取代磺酰基,探针分子的ICT通道打开,发出明显的绿色荧光,量子产率为9.01%,荧光增强约110倍,显示了超高的灵敏度。(四)我们设计合成了一个基于BODIPY母体的检测Cys的比率计型荧光探针S4。探针S4以对甲基苯磺酰基为报告基团,能显著区别Cys,Hcy和GSH这三个同源型RSS,并能实现对Cys的快速、灵敏响应(响应时间小于1分钟),具有广阔的应用前景。
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