miR-30a抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leec208
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目的:研究miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用,并探讨其可能作用机制。方法:首先用Ad-BMP9处理间充质干细胞C3H10T1/2,通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测早期成骨指标ALP、Western blot和PCR检测中期成骨指标骨桥蛋白(OPN),茜素红S染色检测钙盐沉积了解BMP9对C3H10T1/2细胞的晚期成骨分化作用,同时用Real-time PCR检测miR-30a在该成骨分化中的变化。然后用BMP9条件培养基分别作用Ad-mmu-miR-30a和Ad-RFP预处理10h的C3H10T1/2细胞,检测成骨指标ALP、OPN和钙盐沉积的表达。接着用流式细胞术和MTT法研究miR-30a对C3H10T1/2细胞增殖的影响。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中的可能作用机制。结果:Ad-BMP9处理C3H10T1/2细胞7天后ALP活性的表达增高;第10天,OPN的表达增加;第14天,试验组钙盐的沉积也明显多于对照组。而过表达miR-30a后,抑制了Ad-BMP9诱导的成骨分化,对C3H10T1/2细胞的增殖和形态影响也比较小。同时发现过表达miR-30a后,Runx2蛋白水平较对照组下降而mRNA水平基本没有变化。结论:miR-30a可以抑制BMP9诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化,其作用机理可能和Runx2相关。
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