【摘 要】
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欧李（Cerasus humilis（Bge.）Sok.）樱桃落叶小灌木,是我国大西北地区造林绿化的先锋树种,也是我国特有的果树。欧李果实呈鲜红色,富含多种糖类、有机酸、氨基酸、维生素和矿物质元素,香气独特,含钙量高,是天然的钙质来源,因此被称为“钙果”。多糖是一种具有免疫调节、抗肿瘤、抗癌、抗菌、抗氧化等多种生物活性的高分子化合物。近年来,欧李发展很迅速,其开发利用已经受到社会广泛关注。随着欧李
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欧李（Cerasus humilis（Bge.）Sok.）樱桃落叶小灌木,是我国大西北地区造林绿化的先锋树种,也是我国特有的果树。欧李果实呈鲜红色,富含多种糖类、有机酸、氨基酸、维生素和矿物质元素,香气独特,含钙量高,是天然的钙质来源,因此被称为“钙果”。多糖是一种具有免疫调节、抗肿瘤、抗癌、抗菌、抗氧化等多种生物活性的高分子化合物。近年来,欧李发展很迅速,其开发利用已经受到社会广泛关注。随着欧李深加工发展起来的产品包括欧李果汁、果脯、果酒等,但目前对欧李多糖（Cerasus humilis polysaccharide,CHP）的研究鲜有报道。本文以陕西榆林沙地栽培的欧李为原料,采用水提醇沉法提取欧李多糖,利用响应面法优化提取工艺,对提取的欧李多糖用DEAE-52纤维素柱层析、G-100葡聚糖凝胶柱纯化。用高效液相色谱、凝胶渗透色谱、紫外光谱、红外光谱和环境电子扫描显微镜对欧李纯化多糖（Cerasus humilis purified polysaccharide,CHPP）结构进行表征,并测定欧李多糖的抗氧化活性。以小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,通过研究不同浓度的CHPP-2（20～640μg/m L）对RAW 264.7细胞的增殖、吞噬能力、活性氧的作用,探究其对分泌NO、细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-β的影响评价其免疫调节活性。主要研究结果如下:1、欧李多糖的最佳提取工艺条件为提取温度79℃,提取时间2 h,液料比16:1（m L/g）。在此条件下,欧李干粉多糖得率为（32.18±0.08）%。纯化后欧李多糖主要有CHPP-1和CHPP-2两个组分,CHPP-1、CHPP-2中多糖含量分别为99.16%和99.33%。2、CHPP-1的单糖组成及摩尔占比为阿拉伯糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖=51.4∶20.29∶17.36,分子量为47.26 k Da。CHPP-2的单糖组成及摩尔占比为阿拉伯糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖=41.81∶28.24∶11.68,分子量为22.94 k Da。两个组分均为吡喃环型多糖,均不含核酸、蛋白质及其他杂质。环境电子扫描电镜观察到CHPP-1与CHPP-2结构相似,呈片状,但CHPP-2的片状结构更为完整、平滑。3、采用DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羟自由基清除能力和总还原能力等方法对欧李多糖进行体外抗氧化研究。结果表明:在1.0 mg/m L的质量浓度下,欧李多糖对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基都有一定清除能力,总还原能力较强,并且呈现出剂量依赖效应。4、细胞形态学、MTT试验和中性红吞噬试验表明,在20～640μg/m L浓度范围内,经CHPP-2处理后,RAW 264.7细胞的体积稍有增大,细胞个数明显增多,符合巨噬细胞被激活后的形态特征。CHPP-2随浓度增大可显著增强巨噬细胞的增殖活性,中性红的吞噬能力也明显提高。经酶联免疫吸附试剂盒测定试验表明,CHPP-2在20～640μg/m L浓度范围内,能有效激活巨噬细胞,刺激细胞分泌NO和TNF-α、IL-6及IFN-β,且呈剂量依赖性。
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