猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)在分类学上为圆环病毒科圆环病毒属,是迄今为止发现的最小动物病毒之一。它含有共价闭合的单股环状负链DNA,基因组大小约为1.76Kb。已知的PCV共有两个血清型,即PCV1和PCV2,PCV1为非致病性病毒;PCV2为多种猪常见疾病的病原,感染后导致机体免疫抑制,与其它病原体一起引起混合感染或继发感染,另外该病毒的感染具有持续性长的特点,使疾病长期存在难以根除,给养猪业造成极大的损失。目前对于该病毒的控制主要以注射PCV2疫苗和加强生产管理为主。随着分子生物学技术的发展,借助新的分子育种技术获得抗PCV2猪已成为可能。本实验室利用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)结合转基因技术成功培育出F0代抗PCV2转基因猪,并且在分子水平和细胞水平验证了其抗病性。本研究以F1代转基因公猪与野生型母猪杂交获得的F2代抗PCV2转基因猪为对象,分别从DNA水平、RNA水平及活体水平对其遗传表达稳定性、抗PCV2感染效果进行检测与分析,以获得安全、有效的抗PCV2转基因猪新品种。主要结果如下:(1)经生物荧光灯、PCR检测,出生的37头F2代猪中有26头转基因猪,阳性率达70.2%,外源基因能够稳定遗传。(2)si RNA在转基因猪体内能够表达,不同个体同一组织的si RNA表达量存在显著差异(P<0.01)。(3)利用PCV2加免疫刺激物的方式对仔猪攻毒可引起PMWS症状,血清病毒数较低时,转基因猪具有一定的抗病毒效果。(4)攻毒后,四组抗体水平都先下降后回升。A组(转基因直接感染组)和C组(转基因接触组)的回升速度分别快于B组(野生型直接感染组)和D组(野生型接触组),且在第56天C组抗体水平显著高于D组。(5)血常规结果显示,A组和B组、C组和D组各个时期各项血液指标都没有显著性差异(p>0.05)。该结果说明,转基因猪和野生型猪机体的新陈代谢和功能调节基本保持一致。(6)攻毒期间猪只各个时期的体重结果显示,转基因猪和野生型体重没有差异(p>0.05)。(7)攻毒后采集仔猪组织器官进行免疫组化实验的结果显示,转基因和野生型猪中PCV2蛋白的沉积没有差异。综上所述,所获得的转基因猪都能表达抑制PCV2的siRNA;活体攻毒后猪只血清抗体先下降后上升,血清病毒数较低时,转基因猪具有一定的抗病毒效果;血常规结果表明,外源基因的转入不影响猪只的新陈代谢和机体机能。