论文部分内容阅读
目的:为探讨小肠移植术后早期移植肠运动功能障碍的机理,明确COX-2在大鼠早期移植肠功能障碍中的作用和机制,了解早期移植肠运动功能障碍的表现,同时寻求有效的治疗方法。 方法:本课题利用显微外科技术,建立了大鼠原位全小肠移植模型。为了避免免疫排斥和抗排异药物对移植物的复杂影响,采用同系大鼠(BN→BN)间移植。在稳定的小肠移植模型基础上,采用了RT-PCR的方法观察供肠及术后早期不同时段—术后0h、术后12h、术后24h和术后48h移植肠肌层中炎症反应的关键调控因子—COX-2 mRNA的表达情况。并采用LAB-SA免疫组化染色法了解COX-2蛋白的表达及其在肠肌层中的细胞定位,本课题也首次使用透射电子显微镜观察移植肠肌层的变化,以期了解早期移植肠运动功能障碍的机理。同时结合对正常小肠和48h移植肠肌条机械活动的体外试验,在体小肠传输实验和移植肠运动功能的放射学评价,明确早期移植肠运动功能障碍存在的特征。最后通过小肠传输实验观察了具有COX-2选择性抑制作用的中药青藤碱对早期移植肠运动功能障碍的疗效。 结果: 1.通过学习,熟练掌握大鼠原位全小肠移植技术,建立稳定的小肠移植模型。在正式实验阶段,供体手术时间平均为41.5±1.5min。受体手术时间平均为88.2±10.5min,其中吻合静脉时间平均为22.2±3.8min,吻合动脉平均时间为16.0±2.8min,吻合肠管(两个吻合口)平均时间为28±4.4min。正式实验阶段60例大鼠原位小肠移植,手术成功率86.7%。静脉血栓、腹腔出血和腹腔感染仍是大鼠原位小肠移植模型的主要死亡原因。大体病理观察术后24h可见移植肠轻度扩张,周径增粗,肠壁水肿,外观呈玫瑰色,48h上述表现更为明天津医科大学博士学位论文中文摘要显。常规病理HE染色见术后12h小肠粘膜绒毛肿胀明显,术后24h小肠粘膜大量剥落。术后48h小肠粘膜再生明显,术后96h小肠粘膜的绒毛高度等己接近正常。所有手术成功的大鼠均在术后3h内清醒,6h左右恢复进水,24h内恢复进食。术后72h大鼠体重平均减少5%左右。 2.RT-PCR法检测小肠移植手术中供肠及术后不同时段小肠肌层COX一2mRNA的表达结果显示:COX一2 mRNA在正常情况下只有微量表达;供肠组COX一2mRNA的表达量迅速上调:移植术后0h,COX一2 mRNA的表达进一步上调,在术后24h COX一2基因的表达达到高峰,然后迅速下调。免疫组化对小肠COX一2蛋白的检测表明:正常对照组小肠肌层中寄居有巨噬细胞,COX一2蛋白无表达或仅有微弱表达;术后24h肠肌层多个单核一巨噬细胞的胞浆里有COX一2蛋白的强阳性表达,正常小肠和术后24h肠肌层COX一2蛋白的表达存在着显著差异。本实验也首次发现粘膜层也存在着COX龙蛋白的表达,表达定位在粘膜上皮细胞和粘膜固有层白细胞。小肠平滑肌细胞本身并无COX一2蛋白的表达。透射电镜观察大鼠小肠移植术后早期各阶段小肠肌层的超微形态改变发现:术后0h肌层巨噬细胞活化,炎症细胞浸润,免疫应答反应存在,同时见到小肠平滑肌细胞损害征象。术后24h上述表现更为明显,平滑肌细胞的损伤程度也较0h组更为严重。 3.小肠环行肌条的体外收缩实验表明:小肠移植术后48h移植肠肌条的自发性收缩力与正常小肠肌条比明显降低,48h移植肠肌条对乙酞胆碱刺激的反应明显性也较正常小肠减低。小肠传输实验显示:移植术后48h小肠的传输功能明显延迟。灌胃钡剂造影的放射学观察也直观地显示:小肠移植术后移植肠传输功能明显降低,胃排空延迟。 4.小肠传输实验观察具有COX一2选择性抑制作用的中药青藤碱对移植肠运 动功能障碍的影响的实验表明:小肠移植手术中供受体同时给青藤碱可明显改 善小肠传输功能。 结论: 小肠移植手术造成术后早期移植肠肌层COX一2基因和蛋白的渐进性高表天津医科大学博士学位论文中文摘要达,表现为肠肌层强烈的分子和细胞的炎症反应,从而直接或间接地影响了小肠的运动功能。具有COX一选择性抑制作用的中药青藤碱供受体同时给药对改善移植肠运动功能具有显著作用。