流行性感冒简称流感,是由流感病毒(influenza virus)引起的急性呼吸系统疾病,具有传播迅速,可反复感染的特点。预防流感大流行爆发的最有效手段是接种流感疫苗。传统流感病毒疫苗目前还存在很多需要改进的地方,使用佐剂是改进方法之一。在流感疫苗中使用佐剂能够增强其免疫原性,并且能够减少单剂流感疫苗的用量,对于开发能够预防潜在的大流行流感的疫苗以及在大流行流感爆发时候迅速生产足够剂量的疫苗等均具有现实意义。第一部分纳米乳剂作为H3N2灭活流感病毒疫苗佐剂的研究乳剂作为流感疫苗佐剂已经具有一定的应用,纳米乳剂是粒径小于100nm的乳剂。本实验首先寻找具有安全性的,能够形成纳米乳剂的表面活性剂、助表面活性剂、油相和水相,之后通过三元相图法对各相的成分及比例进行研究,确定EL和Span-80质量比为1：1的混合物作为表面活性剂,配方为EL-Span-80-1,2丙二醇-注射用大豆油。将得到的优化纳米乳剂包裹H3N2灭活流感病毒疫苗接种昆明种小鼠。纳米乳剂组小鼠的血凝抑制效价在42d时达到1920,中和抗体滴度达到447,均超过铝佐剂组及疫苗组4倍以上,并且该组小鼠体重增长正常,证明纳米乳剂作为流感疫苗佐剂同时具有安全性及有效性,是较好的流感疫苗佐剂候选。第二部分中草药提取物作为H3N2灭活流感病毒疫苗佐剂的研究我国具有中草药提取和应用的传统优势。一些中草药在应对禽流感以及甲型H1N1流感的过程中扮演了重要角色,某些中草药提取物能够增强免疫反应也是研究人员的共识。本实验采用40种中草药提取物作为流感疫苗的佐剂候选,在动物体内进行试验,从中筛选有效的佐剂,并研究佐剂与疫苗的剂量的最佳配比。首先将40种中草药提取物分别与H3N2灭活流感病毒疫苗混合,接种小鼠,初免后每隔7d尾部动脉采血,21d时加免一剂,采血后分离血清,测定各中草药提取物佐剂组及对照组对H3N2病毒的血凝抑制效价并进行对比,初步筛选出锁阳、天冬及鳖甲三种能够明显提高血凝抑制抗体的佐剂候选。之后对初步筛选中效果最好的锁阳提取物设计流感疫苗及锁阳剂量的二次旋转回归正交试验,证明2.5μg血凝素含量和0.8mg锁阳含量是最优化比例,数据拟合为1778,与实验数据1824基本相符,证明该方法合理,数据可靠。锁阳血凝抑制效价可达1824,中和抗体滴度达562,均高于铝佐剂组及疫苗组4倍以上。并且各组小鼠体重增长超过空白对照组,证明锁阳作为佐剂具有安全性及有效性。