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松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)病是松树上的一种毁灭性病害,具有危害性大、传播速度快、防治难度大等特点,是世界性检疫对象。前人对松材线虫病的病源、致病机理以及防治技术进行了大量的研究。自发现松材线虫病起,国内外投入了大量的人力、物力和财力来防治该病,但该病到目前为止还没有得到有效控制,且仍有继续蔓延的趋势。本研究在前人研究的基础上就松材线虫简便有效人工饲养方法的建立和利用RNA干扰技术抑制松材线虫的繁殖进行了初步研究,结果表明:1.50条松材线虫在培养9天后就进入了大量繁殖的指数生长期,培养10天松材线虫的数量可扩大300倍,培养15天数量可扩大数千倍。2.在传统形态分类上,松材线虫和拟松材线虫主要依靠雌成虫的尾部特征来区分,幼虫则较难鉴定。本实验根据两者在ITS-1区的细小差别设计了引物,PCR反应后电泳,用SF+R引物能出现约340bp长度目的条带的就是松材线虫,而用NF+R引物有目的条带的为拟松材线虫,这样就可以准确地区分两个形态特征很相似的近缘种。3.松材线虫的单异活体培养不但操作简单,而且产量比较高。采用PDA平板培养灰葡萄孢,待灰葡萄孢铺满平板后接种松材线虫,25℃恒温培养15天,然后漏斗收集是简便有效的松材线虫人工饲养方法。4.利用不同物种间关键基因的高度保守性,从秀丽隐杆线虫RNA聚合酶基因出发克隆了松材线虫RNA聚合酶基因片段,同时选用了带双启动子的载体LITUMS38i,成功构建了能表达双链目的片段的重组载体。5.松材线虫的RNA聚合酶基因片段双链RNA(dsRNA)通过对虫体浸泡可使双链RNA(dsRNA)干扰松材线虫的正常发育,从而有效地抑制松材线虫的繁殖。利用浸泡法进行松材线虫双链RNA(dsRNA)的干扰,在20℃浸泡的干扰效果要好于前人报道的4℃浸泡的干扰效果。