硫化氢对离体大鼠心脏的保存作用及机制研究

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目的心脏移植是目前解决终末期心脏病的最好方法,但是心脏移植的开展,很大程度上受到供心保护条件的限制。目前心脏的冷保存时间仅为4-6h,而且脏器长时间的缺血会严重影响移植后受体的生存效果。Eric等[1]发现将小鼠置于不同浓度(0~80 ppm )的H2S气体中,小鼠出现了类假死( suspended animation-like)现象,与某些动物生理条件下自然发生的冬(夏)眠很相似。我们认为此发现对提高器官保存时间和效果有很大的价值,本实验的目的是研究H2S对离体大鼠心脏的保存作用,以寻求一种新的供心保存方法,解决心脏移植中的供体保存问题。方法成年健康雄性SD大鼠24只,随机分为4组。戊巴比妥麻醉后迅速取下心脏,悬挂于Langendorff装置,在37℃下,以95%O2和5%CO2饱和的KH液进行灌注,30分钟后测定左室压力增高率(dp/dt)、左室收缩峰压(LVPSP)、左室舒张末压(LVEDP),计算左室发展压LVDP=LVPSP-LVEDP。然后将心脏用30ml的4℃心脏心脏保存液(共4种,详见下文),以75mmHg压力经主动脉进行灌注停跳。自Langendroff装置取下心脏后置入100ml相同的心脏保存液中,4℃下保存6小时。取出心脏再次置于Langendorff装置进行灌注,灌注条件同前,记录心脏自再灌注到复跳的时间、再灌注30分钟后心率(HR)、左心室压力增高率(dp/dt)、LVPSP、LVEDP,及LVDP。最后取下心脏留取标本。4组心脏保存液为:组1(对照组):采用未经气体饱和的KH液进行停搏、保存;组2在KH液中加入1μmol/L NaHS;组3在KH液中加入1μmol/L NaHS及10μmol/L格列本脲;组4为St . ThomasⅡ液(STH)。留取的心肌标本分别进行电镜检查、心肌含水率测定、ATP含量测定和TUNEL染色。结果1、2、3和4组心脏再灌注后+dp/dtmax恢复率分别为36.95±10.05%,57.32±10.10%,27.97±10.48%,56.38±13.90%;-dp/dtmax恢复率分别为33.88±6.60%,56.12±8.18%,28.89±16.83%,56.59±6.31%;LVDP恢复率分别为37.89±6.69%,62.96±10.24%,29.67±13.61%,61.25±12.20%。组2及组4 +dp/dtmax、-dp/dtmax、LVDP恢复率显著高于组1及组3(P<0.001)。1、2、3和4组心脏复跳时间分别为1080.5±427.8秒,431±119秒,173±56秒,7±5秒,4组间复跳时间有显著差异(P<0.001);组4立即复跳,其余三组均有不同程度室颤发生。1、2、3和4组心脏的心肌含水率分别为84.7±0.9 %、84.2±1.9%、85.2±1.2%和84.4±0.8%,组间无显著差异。心肌透射电镜超微结构观察,组2心肌保存最好,组4次之,组1及组3心肌损伤严重。再灌注后1、2、3和4组大鼠心脏心肌ATP含量(μg/g)分别为155±45,388±40,145±26和187±28。组2显著高于其它三组(P<0.001),其余三组间无显著差异(P>0.05)。1、2、3和4组心脏心肌调亡指数(%)分别为34.2±6.3,11.2±3.3,38.8±5.7和25.2±6.4;组2心肌细胞凋亡率显著低于其它三组(P<0.001);组1和组3显著高于组4(P<0.05)。结论1、含1μmol/L H2S的KH液对离体大鼠心脏的保存具有保护作用;2、经其保存后心功能指标的恢复情况与STH液相似,心肌能量代谢、超微结构改变及心肌细胞调亡指数等指标优于STH液;3、其保护作用可以被格列本脲阻断,提示其作用机制依赖于KATP的开放。
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