论文部分内容阅读
目的:三氯乙烯(Trichloroethylene,FCE)作为一种工业原料广泛应用于有机合成、五金、电子等行业,职业接触主要通过呼吸道吸入和皮肤直接接触吸收,可造成心脏、肝脏、肾脏和神经系统等多脏器损害,尤其以三氯乙烯接触者患过敏性皮炎的发病率高,发病以皮肤过敏性损害为主要表现,危害十分严重。本课题通过对BALB/c小鼠采用背部皮内注射TCE的染毒方式建立三氯乙烯所致过敏性皮炎的动物模型,从免疫学角度研究TCE所致过敏性皮炎的发病机制,为进一步探讨三氯乙烯的免疫毒性提供实验依据。
方法:本课题依据实验动物体重随机分为三组:阴性对照组、TCE实验组、阳性对照组;采用背部皮内注射的染毒方式进行染毒,分为致敏和激发两个阶段进行,每批实验动物于激发后第三天处死;染毒过程中对实验动物每周进行称重,密切观察实验动物的状态及注射部位皮肤的改变,并用绵羊红细胞诱导小鼠DTH,使用游标卡尺测定各组实验动物的足跖增厚程度;实验动物处死后,对其免疫器官进行称重并计算各脏器系数;对背部皮肤及免疫器官进行组织病理学检查,经HE染色后光镜下观察各器官组织结构变化情况;免疫组化方法检测背部皮肤组织中Langerhan’s细胞特异性S-100蛋白的表达量;对实验动物免疫器官淋巴细胞分别进行细胞免疫功能测定、体液免疫功能测定和非特异性免疫功能测定,其中包括MTS法检测T、B淋巴细胞活性及增殖转化能力,滴片法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能,LDH法测定NK细胞杀伤活性,ELISA法测定实验动物血清中炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ的分泌;Western-Blotting技术检测实验动物背部皮肤及免疫器官内炎性因子相关蛋白MCP-1、TNF-α蛋白的表达量;RT-PCR技术检测实验动物背部皮肤及脾脏内炎性因子相关基因MCP-1、TNF-α和IFN-γ基因的表达量。
结果:三氯乙烯可刺激小鼠背部皮肤出现丘疹、破损、大疱、溃疡、结痂,甚至坏死等表现;致使小鼠足跖肿胀试验呈阳性结果,并导致脾脏重量增加,胸腺重量减少,引起胸腺萎缩和脾肿大,且胸腺脏器系数显著降低;光镜下观察三氯乙烯染毒小鼠皮肤组织发生明显的炎症改变:真皮、毛囊周围水肿,横纹肌坏死,肌层中有大量中性粒细胞、炎细胞浸润;脾脏生发中心增大,明亮,B细胞生成活跃;胸腺皮质显著增厚;免疫组化发现三氯乙烯染毒小鼠背部皮肤组织Langerhans细胞中特异性S-100蛋白的表达量显著增高;说明三氯乙烯可造成皮肤组织炎症,并诱导实验动物免疫器官及背部皮肤的组织形态发生病理性改变,初步证明三氯乙烯对机体具有免疫毒性。
三氯乙烯可诱导实验动物细胞免疫功能亢进,同时增强体液免疫功能:包括增强T、B淋巴细胞活性及诱导T淋巴细胞增殖转化能力显著增强,刺激实验动物血清中炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ分泌增加;三氯乙烯还可导致实验动物非特异性免疫功能亢进:包括显著增加巨噬细胞吞噬率及增强NK细胞杀伤活性;分子生物学检测发现:包括Western Blotting分析显示三氯乙烯能够上调实验动物皮肤和免疫器官内单核细胞趋化蛋白(MCP-1)及TNF-α蛋白的表达量;同时,RT-PCR分析亦显示三氯乙烯能够上调皮肤和脾脏组织中MCP-1、TNF-α及IFN-γ基因的表达量;说明三氯乙烯在细胞水平上诱导了实验动物免疫功能亢进,在分子水平上能够上调皮肤及免疫器官内炎性因子相关蛋白和基因的表达量。综上可以证明三氯乙烯能够诱发实验动物皮肤发生炎症改变,并且刺激机体免疫功能异常增高。
结论:通过本课题的研究表明:三氯乙烯具有免疫毒性,能够诱导免疫应答异常增高;三氯乙烯所致过敏性皮炎的免疫学发病机制属于迟发型超敏反应。