利用茜素红S-Cu(Ⅱ)络合物为探针的化学发光成像法检测人血清蛋白质

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本论文分为两部分。 在第一部分,建立了以茜素红S(ARS)-Cu(ⅡI)为探针的聚丙烯酰胺凝胶电泳化学发光成像法间接检测血清中蛋白质。这个方法足建立在Cu(Ⅱ)能催化鲁米诺-过氧化氢化学发光体系,并且具有较高的灵敏度的理论基础之上。然而Cu(Ⅱ)不能直接与蛋白质发生作用而检测蛋白质,因此Cu(Ⅱ)的高效催化发光性无法直接的利用到检测血清蛋白质中。为了克服这一缺陷,本文选择了染料茜素红S作为中间介质,通过茜素红S与Cu(Ⅱ)发生络合作用,还可以与蛋白质在适当条件下结合的性质,间接检测被ARS-Cu(Ⅱ)结合的蛋白质。这种方法开辟了一条化学发光成像法检测蛋白质的新途径。采用此方法分别检测了单向,双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的人血清蛋白质,实验结果表明此方法不仅可以检测到直接发光法不能检测到的蛋白质,而且检测直接在凝胶上进行,不需要进行膜转移等繁琐的操作。此外,本文建立的方法的灵敏度比考马斯亮蓝R250(CBB-R250)染色法要高,同时还对实验条件进行了优化,分别对ARS溶液的pH、Cu(Ⅱ)和ARS的浓度及两者的络合比例、EDTA络合剂用量等实验条件都进行了考察,并对此探针与蛋白结合及催化发光的机理进行了讨论。 在本论文的第二部分,对高效毛细管电泳法(HPCE)和高效液相色谱法(HPLC)手性分离肾上腺素类药物的研究进展总结概述,将肾上腺素类药物的手性拆分方法进行了详细的阐述。在HPLC中,主要针对手性固定相、手性流动相和手性衍生试剂的分类和它们对肾上腺素药物拆分的实例进行讨论;在HPCE中,对毛细管手性添加剂分类,对肾上腺素类药物手性拆分实例进行了列举。 此外,还对近些年发展起来的微流控芯片技术和毛细管电色谱技术等新的研究领域进行了简要的概述,并对今后肾上腺素类药物的手性拆分前景作出了展望。
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