目的以水通道蛋白4为切入点,开展对利水类方药五苓散治疗肾阳虚水肿大鼠水液代谢异常相关性疾病的研究;通过对水通道蛋白的研究,将可能有助于寻找改善水液代谢紊乱疾病的新方法及潜在药物作用的新靶点,并为调节水液代谢类方剂治疗肾阳虚水肿的作用机制提供新的研究思路。根据导师多年临床应用五苓散治疗水液代谢的相关疾病疗效理想,故本实验选取五苓散用于对肾阳虚水肿大鼠水液代谢变化、Na~+-K~+-ATP酶活力观察及水通道蛋白4表达的影响进行研究。方法首先,50只SD大鼠为适应环境,在屏障环境的代谢笼内喂养3天后造模。造模第1天和第8天选用盐酸多柔比星尾静脉注射,两次注射量分别为4mg/kg、3.5mg/kg,同时每天臂部肌肉注射氢化可的松14天,注射量为3.75mg/kg,14天造模结束。造模结束后,将造模成功大鼠随机分为模型组(M组)、五苓散低剂量组(W-L组)、五苓散中剂量组(W-M组)、五苓散高剂量组(W-H组)、呋塞米组(F组),每组8只,另外选8只未干预的大鼠为正常组(NG组)。W-L组、W-M组、W-H组分别按五苓散生药0.13g/kg、0.26g/kg、0.52g/kg的体重灌胃,F组的呋塞米按0.36mg/ml进行灌胃,灌胃量为2ml/次,每日两次;NG组、M组灌胃等体积的生理盐水。各组连续灌胃治疗7天。代谢笼收集24h尿液,BCA检测尿蛋白的含量,实验结束时摘取大鼠肾脏,应用超微量ATP(Na~+K~+)酶试剂盒测定肾脏Na~+-K~+-ATP酶活力;应用酶联免疫(ELISA)法检测肾脏AQP4浓度;应用免疫组化技术和蛋白质印记法(Western Blot)检测肾组织AQP4蛋白表达及分布情况;应用real-time PCR检测肾脏组织AQP-4蛋白mRNA的表达情况并进行分析。结果1、大鼠造模后,出现体重减轻、体温下降、毛发干枯、反应迟缓、食欲减低、大便不成形,并出现腹部及爪部水肿等症状。24h尿量变化显著减少,24h尿蛋白含量变化显著增多,参考中医肾病水肿诊断标准,以及造模文献,结合上述症状表现,认为本实验造模成功。2、实验中发现,五苓散及呋塞米治疗后,大鼠尿量增加,大便开始成形,食量、体重、体温渐增,精神状态渐好,尿量增加,水肿渐消,同时,尿蛋白减少,其中起效比较快的是F组而最终恢复较好的是W-M组与W-H组。3、造模后,Na~+-K~+-ATP酶活性降低,肾组织AQP4表达增加,五苓散干预后Na~+-K~+-ATP酶活性提高,肾组织AQP4表达降低。4、经五苓散治疗后,Na~+-K~+-ATP酶活性升高,AQP-4表达降低。经统计有显著意义。结论1、五苓散治疗肾阳虚水肿有显著的利尿消肿的作用,不同浓度,有不同疗效,而以五苓散中剂量与高剂量疗效更为理想。2、造模后,Na~+-K~+-ATP酶活性降低,肾组织AQP4表达增加;五苓散干预后Na~+-K~+-ATP酶活性提高,肾组织AQP4表达降低。3、五苓散治疗肾阳虚水肿模型大鼠与提高Na~+-K~+-ATP酶活性和下调AQP4表达有关。