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目的:急性T淋巴细胞白血病（Acute T lymphocytic leukemia,T-ALL）是一类发病快、危险程度较高的血液系统恶性肿瘤。由于此类疾病的发病机制尚未研究清楚,导致临床上治疗效果不尽人意。前期研究发现,山椒子烯酮对多种类型肿瘤细胞的增殖均有较明显的抑制效果。本实验在前期研究的基础上,探究山椒子烯酮对急性T淋巴细胞白血病的影响。体外实验,研究山椒子烯酮抑制Molt-4细胞增殖的作用及分子机制。体内实验,探究山椒子烯酮体内抗T-ALL的药效及分子机制并进行安全性的初步观察。为临床研究抗T-ALL药物奠定基础。方法:1山椒子烯酮体外抑制细胞增殖的初步研究体外培养BGC823、MGC803、MKN45和Molt-4细胞。采用细胞增殖/毒性（CCK-8）法检测山椒子烯酮对4种肿瘤细胞增殖作用的影响,并计算出半数抑制率IC50值。以Molt-4细胞为研究对象,不同浓度山椒子烯酮（0.2μM、0.4μM、0.8μM、1.6μM、3.2μM、6.4μM）分别作用24 h、48 h、72 h,用CCK-8法检测细胞存活率的时效关系和量效关系。山椒子烯酮以1.05μM、2.09μM、4.18μM浓度作用24 h后,于显微镜下观察Molt-4细胞形态。2山椒子烯酮抑制Molt-4细胞增殖的分子机制研究山椒子烯酮以1.05μM、2.09μM、4.18μM浓度作用24 h后,应用蛋白免疫印迹法探究（1）山椒子烯酮对内源性凋亡通路相关蛋白的影响;（2）山椒子烯酮对JAK/STAT和Src/STAT信号通路激酶磷酸化蛋白表达的影响;（3）山椒子烯酮对Molt-4细胞中p-Erk蛋白表达的影响。山椒子烯酮以1.05μM、2.09μM浓度分别作用24 h、48 h、72 h后,应用蛋白免疫印迹法探究山椒子烯酮对Molt-4细胞凋亡蛋白表达的时效关系。应用RT-PCR技术分析山椒子烯酮对Bax、Bcl-2基因表达的影响。3山椒子烯酮对Molt-4细胞移植瘤小鼠的药效研究除正常组的小鼠外,其余NOD/SCID小鼠进行全身60CO（2 Gy:200rad）照射。隔天,取对数生长期的Molt-4细胞,配成5×l0~7个/m L细胞悬液。然后,每只小鼠皮下注射0.2 m L细胞悬液,建立实体瘤模型。12.50mg·kg-1、25.00 mg·kg-1、50.00 mg·kg-1剂量的山椒子烯酮通过尾静脉注射给药,每2天给药一次。连续给药十二天,观察山椒子烯酮对Molt-4细胞移植瘤小鼠肿瘤质量、肿瘤体积的影响,计算抑瘤率和相对肿瘤增值率。4山椒子烯酮体内抗肿瘤作用的分子机制研究给药结束后,应用蛋白印迹法检测肿瘤组织中p-STAT3、Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白的表达。应用免疫组化法检测肿瘤组织中PCNA的表达。5山椒子烯酮对Molt-4细胞移植瘤小鼠的安全性评价给药过程中,观察山椒子烯酮对Molt-4细胞移植瘤小鼠体质量的影响。给药结束后,计算肝指数和脾指数。检测血清中AST、ALT、ALP、ALB、CRE、UREA、TP和TBIL水平的变化。用HE染色法检测山椒子烯酮对肝组织、脾组织结构的影响。结果:1山椒子烯酮体外抑制细胞增殖的初步研究山椒子烯酮对4种肿瘤细胞均有明显的抑制效果,作用24 h的IC50值分别为10.59μM、4.54μM、15.07μM和2.09μM。经过对比,山椒子烯酮对Molt-4细胞较敏感。山椒子烯酮以0.2μM、0.4μM、0.8μM、1.6μM、3.2μM、6.4μM浓度作用24 h后,Molt-4细胞的存活率明显降低,表明山椒子烯酮抑制Molt-4细胞的增殖存在明显的剂量关系。山椒子烯酮以1.6μM、3.2μM的浓度分别作用24 h、48 h、72 h后,Molt-4细胞的存活率逐渐降低,表明山椒子烯酮抑制Molt-4细胞的增殖存在明显的时效关系。在光学显微镜下观察,山椒子烯酮给药24 h后,Molt-4细胞出现细胞破碎、体积变小、皱缩、同一视野内细胞数量变少等现象。2山椒子烯酮抑制Molt-4细胞增殖的分子机制研究蛋白免疫印迹法结果显示,山椒子烯酮可以显著下调p-JAK2、p-Src、p-STAT3和p-Erk蛋白的表达。同样,山椒子烯酮可以影响内源性凋亡通路关键蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,活化caspase-9、caspase-3蛋白,诱导Molt-4细胞的凋亡。3山椒子烯酮对Molt-4细胞移植瘤小鼠的药效研究在给药第十二天,12.50 mg·kg-1、25.00 mg·kg-1、50.00 mg·kg-1山椒子烯酮组肿瘤的平均体积分别为1459.11±413.48、1388.12±229.20、1144.59±251.77,尤其是50.00 mg·kg-1山椒子烯酮组肿瘤体积有显著性差异（P＜0.01）。与模型组对比,12.50 mg·kg-1、25.00 mg·kg-1、50.00 mg·kg-1山椒子烯酮组肿瘤抑制率为25.89%、50.24%和60.75%。其中,25.00mg·kg-1和50.00 mg·kg-1山椒子烯酮组抑瘤效果显著（P＜0.01）。在给药第十二天,三个给药组的相对肿瘤增值率分别为69.56%、58.07%和52.35%。表明50.00 mg·kg-1山椒子烯酮抑制肿瘤增殖效果较好。4山椒子烯酮体内抗肿瘤作用的分子机制研究蛋白免疫印迹法结果表明山椒子烯酮可以显著下调p-STAT3、caspase-3和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,从而发挥抗肿瘤的作用。5山椒子烯酮对Molt-4细胞移植瘤小鼠的安全性评价在给药期间,与模型组对比,12.50 mg·kg-1、25.00 mg·kg-1、50.00mg·kg-1山椒子烯酮组体重正常增加,无异常现象发生。将长春新碱组和山椒子烯酮各给药组在肝指数、脾指数、肝病理切片和脾病理切片进行对比,表明长春新碱对小鼠肝组织和脾组织的损伤较重,而山椒子烯酮对两种器官没有明显损伤。血清指标结果表明,与长春新碱组进行对比,山椒子烯酮对肝组织和肾组织的损伤较轻,用药更安全。结论:1山椒子烯酮对BGC823、MGC803、MKN45和Molt-4细胞表现明显的抑制活性,尤其是对Molt-4细胞较敏感。2山椒子烯酮可以呈时间依赖性和浓度依赖性抑制Molt-4细胞的增殖。3山椒子烯酮可能是通过JAK/STAT和Src/STAT信号通路诱导Molt-4细胞的凋亡。4山椒子烯酮可以呈剂量依赖性抑制肿瘤组织的增长,体内抑瘤效果较显著。5与长春新碱进行对比,山椒子烯酮对肝组织、肾组织和脾组织损伤较小,安全性更好。