【摘 要】
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目的:通过卵白蛋白（OVA）建立过敏性哮喘小鼠模型,观察加味过敏煎治疗过敏性哮喘的药效作用,并初步探讨加味过敏煎抗敏平喘的免疫分子机制。方法:1.加味过敏煎治疗过敏性哮喘的药效学研究:将48只6周雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松阳性对照组(0.03125mg·kg-1)、加味过敏煎高、中、低剂量组(分别为含生药2.72g·m L-1、1.36g·m L-1、0.
【基金项目】
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2016年国家自然科学基金（项目批准号:81560755）；
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目的:通过卵白蛋白（OVA）建立过敏性哮喘小鼠模型,观察加味过敏煎治疗过敏性哮喘的药效作用,并初步探讨加味过敏煎抗敏平喘的免疫分子机制。方法:1.加味过敏煎治疗过敏性哮喘的药效学研究:将48只6周雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松阳性对照组(0.03125mg·kg-1)、加味过敏煎高、中、低剂量组(分别为含生药2.72g·m L-1、1.36g·m L-1、0.68g·m L-1)。采用OVA致敏和激发构建小鼠哮喘模型。观察激发时小鼠的行为学表现;检测哮喘小鼠吸气相气道阻力（Resistance of Lung,RL）、肺动态顺应性（Respiratory Dynamic Compliance,Cdyn）、1秒用力呼气容积占用力肺活量比值（FEV1/FVC）、呼气峰流速（Peek Expiration Flow,PEF）情况;ELISA法检测血清卵白蛋白Ig E（OVA-s Ig E）含量。2.加味过敏煎治疗过敏性哮喘的免疫分子机制研究:分组与造模方法同上。采用Invitrogen Procarta Plex多因子免疫技术检测小鼠血清中细胞因子调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子（RANTES）、嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）、白介素5、6、9、12（IL-5、IL-6、IL-9、IL-12）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR法检测肺组织中Th1型细胞因子γ干扰素（IFN-γ）及其特异性转录因子T-bet的m RNA表达水平;Th2型细胞因子白介素4（IL-4）及其特异性转录因子GATA-3的m RNA表达水平。结果:1.加味过敏煎治疗过敏性哮喘的药效学研究:与模型组加味过敏煎各剂量组小鼠哮喘发作表现如喷嚏、抓鼻或挠痒持续时间、呼吸急促、腹肌收缩、躁动等症状明显减轻;肺功能测试结果显示,与模型组相比,加味过敏煎高、中剂量组均能不同程度升高哮喘小鼠Cdyn（P＜0.001～0.05）、FEV1/FVC比值（P＜0.05）和PEF（P＜0.01～0.05）,而低剂量组有升高趋势（P＞0.05）。加味过敏煎高、中剂量组能不同程度降低RL值（P＜0.01～0.05）,低剂量组有降低趋势（P＞0.05）。2.加味过敏煎治疗过敏性哮喘的免疫分子机制研究:2.1加味过敏煎对哮喘小鼠血清中相关细胞因子蛋白水平影响:多因子免疫检测结果显示:与模型组相比,加味过敏煎各剂量组均可显著提高小鼠血清IL-12含量（P＜0.01）,显著降低RANTES、Eotaxin、IL-5、IL-6含量（P＜0.001～0.05）;加味过敏煎高、中剂量组可不同程度降低IL-9、TNF-α的含量（P＜0.01～0.05）;低剂量组对IL-9和TNF-α的含量有降低趋势。2.2加味过敏煎对Th1/Th2型细胞因子m RNA表达的影响:实时荧光定量PCR结果显示:与模型组相比,加味过敏煎各剂量组均能显著下调小鼠肺组织中IL-4的m RNA表达（P＜0.01）,对GATA-3的m RNA表达有下调趋势（P＞0.05）;加味过敏煎高、中剂量可以明显升高小鼠肺组织IFN-γ的m RNA表达（P＜0.05）,低剂量对IFN-γ的m RNA表达有升高趋势（P＞0.05）,加味过敏煎高剂量可显著上调小鼠肺组织T-bet的m RNA表达,中、低剂量对T-bet的m RNA表达有上调趋势。结论:1.加味过敏煎可明显改善哮喘激发阶段小鼠的发作症状及肺功能指标,进一步证实了加味过敏煎具有平喘的药效作用;2.加味过敏煎可以提高IL-12蛋白含量,上调IFN-γ、T-bet m RNA表达;降低RANTES、Eotaxin、IL-5、IL-6、IL-9、TNF-α蛋白含量,下调IL-4、GATA-3 m RNA表达,针对不同的细胞因子发挥抗炎、平喘的药效作用,在分子水平上体现对过敏性哮喘显著的治疗效果。
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