目的:我国肺癌的发病率和死亡率均位于常见恶性肿瘤的首位。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是最常见的组织学类型（～80%）。临床治疗中伴随细胞毒化疗用药、靶向药物的应用,伴随出现的耐药问题已经成为肿瘤治疗的瓶颈。其中上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）为多种药物耐药相关的重要机制之一,但是其复杂的调控机制尚未完全阐明。课题组前期研究表明,RNA结合蛋白-LIX1L作为间质样细胞的重要标记分子,其高表达与多个NSCLC细胞系EMT相关（未发表）。敲低LIX1L后进行二代测序发现,阿片生长因子受体OGFr（opioid growth factor receptor,OGFr）基因表达显著增加,提示OGFr可能在LIX1L-EMT过程中发挥作用。鉴于此,本研究中我们通过体外实验,初步探讨OGFr在NSCLC细胞增殖、迁移以及侵袭等生物学过程中的作用,为揭示LIX1L基因作用机制奠定基础。方法:1.细胞培养与处理:含1%青霉素/链霉素的双抗及10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养贴壁生长的H358、HCC827、H1975细胞;分别给予上述细胞TGF-β1处理后获得EMT转化细胞,标记为H358T、HCC827T以及H1975T,用于后续实验。2.细胞转染:LIX1L-siRNA、OGFr-siRNA分别转染细胞用于敲低基因表达实验。3.qRT-PCR方法:检测LIX1L、OGFr、CDH1、Vimentin等基因在m RNA水平的表达。4.Western Blot方法:检测LIX1L、OGFr、E-cadherin、Vimentin蛋白水平的表达。5.二代测序:H358T、HCC827T、H1975T细胞转染LIX1L-siRNA后提取细胞总RNA,在敲低效率验证基础上进行二代测序检测。6.MTT方法:检测OGFr-siRNA转染、LIX1L-siRNA转染或OGFr抑制剂NTX处理对细胞增殖的影响。7.克隆形成实验:检测OGFr-siRNA转染、或OGFr抑制剂NTX处理对细胞增殖的影响。8.Transwell小室:检测OGFr-siRNA转染、LIX1L-siRNA转染或OGFr抑制剂NTX处理对细胞迁移和侵袭能力的影响。9.统计学处理:应用SPSS21.0和Graphpad软件对结果进行统计学分析及作图。结果用均数±标准差描述,P＜0.05具有统计学意义。结果:1.二代测序结果及验证:测序结果表明三组细胞均发现下游分子OGFr显著升高,应用Real-Time qPCR验证与测序结果一致。2.检测LIX1L、OGFr基因在H358以及H358T细胞中的表达:H358T细胞较H358细胞相比,LIX1L在m RNA和蛋白水平显著增高,OGFr在m R NA和蛋白水平显著降低（P＜0.01）。3.siRNA转染敲低OGFr表达对H358细胞增殖能力的影响:与对照组相比,其增殖活性（P＜0.05）、克隆形成能力（P＜0.01）均增高。4.敲低OGFr对H358细胞迁移与侵袭能力的影响:与对照组相比,其迁移能力（P＜0.01）、侵袭能力（P＜0.01）均增高。5.OGFr抑制剂NTX处理对H358细胞增殖能力的影响:与对照组相比,其增殖活性（P＜0.05）、克隆形成能力（P＜0.001）均增高。6.OGFr抑制剂NTX处理对H358细胞迁移与侵袭能力的影响:与对照组相比,其迁移（P＜0.01）和侵袭能力（P＜0.01）均增高。7.联合敲低LIX1L、OGFr对H358细胞增殖活性、迁移与侵袭能力的影响:与对照组相比,敲低LIX1L后细胞增殖活性（P＜0.001）、迁移（P＜0.01）和侵袭（P＜0.05）能力降低,联合敲低LIX1L和OGFr,与敲低LI X1L组相比,细胞增殖活性（P＜0.01）、迁移（P＜0.01）和侵袭能力（P＜0.05）升高,但细胞增殖活性（P＜0.05）、迁移能力（P＜0.05）低于对照组水平。8.敲低OGFr对H358细胞EMT标记物E-cadherin与Vimentin表达的影响:H358细胞敲低OGFr后,与对照组相比,EMT标记物E-cadherin与Vi mentin在m RNA和蛋白水平没有显著变化（P＞0.05）。结论:1.给予TGF-β1处理诱导H358、HCC827以及H1975肺腺癌细胞发生EMT后,LIX1L基因表达显著增加,OGFr表达显著降低,提示两者与细胞EMT相关。2.给予二代测序筛选以及验证发现,抑制细胞中LIX1L表达后OGFr表达增加,提示OGFr可能为LIX1L负向调控的下游基因。3.LIX1L、OGFr参与NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭过程的调节,并且OGFr在LIX1L对细胞上述过程的调节中发挥一定作用,提示LIX1L-OGFr在细胞EMT过程中具有重要作用。