【摘 要】
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目的:研究证实,穿透基底膜是肿瘤细胞进行侵袭和转移的第一步,该过程受基底膜各种组成成分的影响。巢蛋白-2（Nidogen-2）是构成基底膜的一种重要细胞外基质蛋白,其与结直肠癌的侵袭及转移的关系尚不清楚。本文通过检测巢蛋白-2在结直肠癌和癌旁正常的粘膜组织中以及在结直肠癌患者和正常人血清中的表达差异,进而探讨巢蛋白-2的表达量与结直肠癌临床病理参数的相关性和潜在临床价值。方法:1.采用Trizol
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目的:研究证实,穿透基底膜是肿瘤细胞进行侵袭和转移的第一步,该过程受基底膜各种组成成分的影响。巢蛋白-2（Nidogen-2）是构成基底膜的一种重要细胞外基质蛋白,其与结直肠癌的侵袭及转移的关系尚不清楚。本文通过检测巢蛋白-2在结直肠癌和癌旁正常的粘膜组织中以及在结直肠癌患者和正常人血清中的表达差异,进而探讨巢蛋白-2的表达量与结直肠癌临床病理参数的相关性和潜在临床价值。方法:1.采用Trizol方法,从50例手术切除的结直肠癌和相应的癌旁正常组织及患者血清提取总RNA,检测巢蛋白-2 m RNA水平;提取组织总蛋白用于Western blot检测巢蛋白-2表达。以50例健康人为对照。2.琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA完整性。3.D7168 Beyo RT II c DNA第一链合成试剂盒逆转录。4.D7262 Beyo Fast SYBR Green q PCR Mix进行q RT-PCR。5.琼脂糖凝胶电泳验证目标产物分子量,与引物二聚体相鉴别。6.Western blot检测正常结直肠组织与结直肠癌组织中巢蛋白-2的表达。7.进一步统计分析巢蛋白-2的表达量与结直肠癌患者临床病理参数的相关性。结果:1.巢蛋白-2在结直肠癌组织和血清中的表达明显增高q RT-PCR检测结果发现,与正常对照组相比,巢蛋白-2在结直肠癌组织以及患者血清中的表达量均明显增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。Western blot检测巢蛋白-2在结直肠癌组织与癌旁正常组织中蛋白水平的表达情况,结果显示,与对照组相比,结直肠癌组织中巢蛋白-2蛋白表达明显增高,提示巢蛋白-2参与结直肠癌的发生、发展。2.巢蛋白-2的表达水平与肿瘤的TNM分期呈正相关,并且,有脉管瘤栓的癌组织表达量高于无脉管瘤栓癌组织,提示巢蛋白-2可促进肿瘤的血行转移。3.利用t检验进一步分析巢蛋白-2表达量与结直肠癌患者临床病理指标的相关性分析。结果显示,巢蛋白-2的表达水平与肿瘤的临床分期T NM分期及有脉管瘤栓呈明显正相关关系（P＜0.05）;同时,巢蛋白-2的表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度没有明显相关性。结论:1.与癌旁正常组织相比,巢蛋白-2的m RNA和蛋白表达水平在结直肠癌组织中均增高。2.高表达的巢蛋白-2与结直肠癌TNM分期呈正相关关系,尤其见于存在脉管瘤栓者。3.与正常人群血清相比,巢蛋白-2的表达水平在结直肠癌患者血清中明显增高,有望成为一种新的结直肠癌生物学诊断标记物。
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