论文部分内容阅读
目的： 观察2-BFI联合雷帕霉素对EAE的干预作用，及其相关细胞因子的改变。 方法： 采用目前公认的皮下注射MOG35-55诱导小鼠免疫反应建立EAE模型。依据随机分组原则将36只雌性C57BL/6小鼠分为三组：正常对照组（Cont rol Group），12只；EAE-生理盐水组（EAE-NS Group），12只；EAE-2-BFI联合雷帕霉素组（EAE-Drugs Group），12只。正常对照组小鼠不做任何处理，与实验组小鼠饲养在同等环境中，以反映其正常生理状态。EAE-生理盐水组小鼠在诱导EAE模型1-14天后给予生理盐水20ml/kg(ip, bid)；15-28天后给予生理盐水1ml/kg(ip, qd)；EAE-2-BFI联合雷帕霉素组在建立EAE模型后第1-14天连续给予2-BFI20mg/kg(ip, bid)；第15-28天连续给予雷帕霉素1mg/kg(ip, q d)。在EAE模型建立后，设定诱导EAE的当天为免疫第0天。每日早晚2次观察小鼠，并记录各组小鼠的体重和神经功能缺损评分的变化。全部小鼠于免疫后第28天处死，取脑和脊髓组织。运用苏木精-伊红染色和Luxol Fast Blue髓鞘染色反应观察中枢神经系统内炎症细胞浸润及髓鞘脱失程度；采用ELISA方法测定脑组织中炎症因子TGF-β、IL-17、IFN-γ，趋化因子CCR6、CCL20的表达。 结果： ⑴小鼠在免疫后第17天开始发病，具体表现为主动活动减少，体重下降，尾巴及四肢都有不同程度的瘫痪等。比较三组小鼠之间体重变化，未见统计学差异(P＞0.05)。在行为学方面，EAE-2-BFI联合雷帕霉素组小鼠不仅EAE发病时间推迟，日均神经功能缺损症状较EAE-生理盐水组显著减轻(P＜0.01)，而且EAE发病率较EAE-生理盐水组也明显降低(P＜0.05)。⑵正常对照组小鼠脊髓组织仅有极少量的炎症细胞，未见脱髓鞘改变；EAE-生理盐水组小鼠脊髓可见大量炎症细胞浸润及典型的“血管套”现象和片状髓鞘脱失改变，其病理学评分显著高于正常对照组(P＜0.01)；而EAE-2-BFI联合雷帕霉素组小鼠的脊髓炎症细胞浸润明显有所减少，髓鞘脱失亦明显减轻，与EAE-生理盐水组比较，差异有显著性统计学意义(P＜0.01)。⑶在免疫后第28天，EAE-生理盐水组小鼠脑组织中细胞因子IL-17、IFN-γ的表达较正常对照组有增加(P＜0.05)，在给予联合用药后，IL-17表达有降低(P＜0.05)，且IL-17的表达量与EAE的神经功能缺损症状评分呈正相关(P＜0.05)；而IFN-γ虽有下降但无统计学差异(P＞0.05)；TGF-β三组小鼠间比较无明显统计学差异(P＞0.05)。⑷与正常对照组小鼠比较，EAE-生理盐水组趋化因子CCR6、CCL20的表达明显增加(P＜0.01)，在联合用药后，CCR6、CCL20的表达较EAE-生理盐水组减少(P＜0.05)，且CCR6的表达量与EAE的神经功能缺损症状评分呈正相关(P＜0.05)，CCL20的表达量与神经功能缺损评分无明显相关性(P＞0.05)。 结论： ①构建的EAE小鼠模型是可靠成功的；②2-BFI联合雷帕霉素用药能够延迟EAE的发病、降低EAE的发病率；③2-BFI联合雷帕霉素用药能明显减轻EAE小鼠的神经功能缺损症状，减少CNS炎症细胞浸润及其髓鞘脱失程度；④2-BFI联合雷帕霉素用药抑制IL-17的分泌，降低趋化因子CCR6、CCL20的表达。