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背景:华法林是被广泛应用的抗凝药,主要用于血栓栓塞性疾病的预防和治疗。然而,华法林治疗指数窄,剂量个体差异大,并有严重出血危险。近年来研究表明CYP2C9和VKORC1单核苷酸多态性是影响华法林药物剂量的重要遗传因素。CYP2C9*3(rs1057910)、*13、C-65(rs9332127)或VKORC1 c.-1639G(rs9923231)携带者华法林维持剂量显著降低,对服用华法林的中国汉族静脉血栓栓塞患者进行基因分型,可预测华法林剂量,从而减少出血的危险。
目的:建立简单、快速、可靠的方法检测CYP2C9*3、*13、C-65以及VKORC1-1639单核苷酸多态性,探讨中国汉族人群深静脉血栓(VTE)患者华法林剂量与各基因型之间以及与年龄、性别、身高、体重等临床因素的关系。
方法:利用primer premier5设计等位基因特异引物,将SNP位点置于引物3’末端,设计野生型和突变型特异引物,分别与共用引物形成引物对。为了提高引物的特异性,在野生型和突变型引物3’端的第2、3或4位引入错配碱基。提取外周血白细胞的基因组DNA,以此作为模板,利用扩增阻滞突变系统(Amplification refractory mutation system,ARMS)聚合酶链式反应(PCR)对中国汉族静脉血栓栓塞患者CYP2C9*3、*13、C-65位点,以及VKORC1-1639位点进行检测,并用限制性片段长度多态性(RFLP)或测序法对部分ARMS-PCR结果进行验证。
结果:ARMS-PCR方法可以区分野生或突变纯合型和杂合型基因型,RFLP或测序结果与ARMS-PCR.结果完全吻合。用ARMS-PCR方法对310例北方汉族人群中静脉血栓栓塞患者CYP2C9*3、*13、C-65以及VKORC1-1639A位点进行检测,等位基因频率分别为4.4％、0.8％、3.8％和8.7％。310例中国汉族人群华法林剂量主要与患者的年龄、身高或体重以及CYP2C9*3和VKORC1-1639G>A有关。
结论:在310例中国汉族人群中华法林剂量主要与患者年龄、体重、CYP2C9*3和VKORC1-1639G>A多态性有关。ARMS-PCR是一种简便、快速、准确、经济的方法,可以用于CYP2C9*3、*13、C-65和VKORC1-1639位点单核苷酸多态性的快速检测。