研究目的:肿瘤中普遍存在可变剪切的现象,通过这种方式,同一基因能够编码并翻译成多种不同或是具有微小差异的蛋白,从而表达不同的功能。这一现象为解释肿瘤的异质性开辟了新的思路。目前,可变剪切在非小细胞肺癌中的研究较少,因此,为了探索其对非小细胞肺癌患者预后的影响以及作用机制,我们开展了本次研究。研究方法:收集The Cancer Genome Atlas数据库非小细胞肺癌522例腺癌患者(LUAD)以及573例鳞癌患者(LUSC)的测序数据,基因表达数据和临床数据。通过TCGA SpliceSeq软件处理测序数据从而得到病人每种可变剪切(AS)事件的剪切百分比(PSI),随后与临床数据以及表达数据相匹配。选取每组中的配对样本计算肿瘤组织和正常组织中显著差异表达的可变剪切事件,随后通过统计学方法计算哪些事件为独立预后因素并建立多因素风险比例回归模型。选取每组中的配对样本计算肿瘤组织和正常组织中显著差异表达的可变剪切因子(SF),随后将差异SF与预后AS做相关性分析;用预后相关的剪切事件所对应的亲本基因进行功能富集分析。对每组的临床数据进行单因素Cox回归分析,将p.value<0.05的临床指标与多因素风险比例回归模型一同建立可视化Nomogram模型。最终,我们收集青岛大学附属医院胸外科术后病理诊断明确的40例腺癌和20例鳞癌患者的新鲜组织。提取收集的新鲜组织样本的总RNA,并反转为cDNA。设计特异性的两段引物,通过qPCR来获取每个组织的PSI数据,随后进行配对样本的差异分析,验证剪切事件的发生。结果:LUAD中男性与女性亚组中各确定8种剪切事件为独立预后因素;LUSC中男性与女性亚组中各确定7种剪切事件为独立预后因素,据此所建立的多因素风险比例回归模型的ROC值也均在0.75以上。此外,我们建立了一个剪切因子与可变剪切事件调控的相关性网络,也根据风险因素预测了其下游可能存在的调控机制。Nomograms模型的C指数均在0.7以上,矫正曲线也显示模型稳定,因此可以用作临床的进一步验证和使用。最终,我们验证了 HNRNPLL、HPCAL1、CCDC88A、RPL29的四种剪切事件,它们的确在肿瘤和正常组织中存在显著的表达差异,可以作为后续研究的重要实验基础。结论及意义:1.本研究以可变剪切为出发点,通过系统的分析发现在非小细胞肺癌中不同性别的患者其剪切特征却有不同。2.本研究探索了包括上游调控因子以及下游信号通路在内的完整作用机制,并在组织样本中进行了初步验证。3.研究拓展可变剪切在临床上的应用,将可变剪切的风险比例回归模型与临床指标结合起来,可以用于预测病人早期复发和肿瘤预后。总之,我们的研究对探索转录本的多样性对非小细胞肺癌的产生和发展的影响具有重要意义,我们所发现的各个独立预后因素均可作为后续研究的方向,临床模型也将指导临床医生判断患者肿瘤的预后和复发情况。