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目的:肾缺血再灌注损伤是内科和外科都比较常见的一种损伤。HMGB1抗体对肾缺血再灌注损伤具有保护作用,但对其在病理学层次上的表达关系缺乏研究;并且相较于其他肾缺血再灌注损伤的保护作用试剂也缺乏对比分析。因此我们建立了大鼠肾缺血再灌注损伤实验模型,观察不同处理方式及不同处理时间,肾脏的损伤情况,进而探讨HMGB1抗体如何对肾缺血再灌注损伤进行保护以及与丙酮酸乙酯对肾缺血再灌注损伤作用行对比分析。方法:建立大鼠肾缺血再灌损伤模型。将其随机分为4个组,分别为空白组、缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组、HMGB1抗体组,每组再按缺血5min、15min、30min、40min分为四个不同时间组。(1)空白(sham)组:操作前30min给予生理盐水腹腔注射,打开大鼠后腹腔,暴露右侧肾蒂相应时间,后逐层关闭切口。24h小后打开大鼠后腹腔取大鼠右侧肾脏标本和腹主动脉采集血液标本。(2)缺血再灌注(IRI)组:操作前30min给予生理盐水腹腔注射,打开大鼠后腹腔,分别用无损伤显微血管夹夹闭右肾动静脉及输尿管相应时间后解除阻断,逐层关闭切口,24h小时后打开大鼠后腹腔取大鼠右侧肾脏标本和腹主动脉采集血液标本。(3)丙酮酸乙酯组:操作前30min给予腹腔注射丙酮酸乙酯(40mg/kg),打开大鼠后腹腔,分别用无损伤显微血管夹夹闭右肾动静脉及输尿管相应时间后解除阻断,逐层关闭切口。24h小后打开大鼠后腹腔取大鼠右侧肾脏标本和腹主动脉采集血液标本。(4)HMGB1抗体组:操作前30min给予腹腔注射HMGB-1抗体(30mg/kg),打开大鼠后腹腔,分别用无损伤显微血管夹夹闭右肾动静脉及输尿管相应时间后解除阻断,逐层关闭切口。24h小后打开大鼠后腹腔取大鼠右侧肾脏标本和腹主动脉采集血液标本。我们对采集的大鼠肾组织进行免疫组化检测、Tunel肾脏细胞凋亡百分比检测、HE染色;对采集的腹主动脉血液进行血清肌酐水平检验;结果:1、免疫组化结果:空白组不同处理时间之间HMGB-1免疫组化表达(平均光密度)差异无统计学意义,处理措施为缺血再灌注、缺血再灌注加丙酮酸乙酯和缺血再灌注加HMGB-1抗体时,不同处理时间之间HMGB-1免疫组化表达(平均光密度)不全相等,差异有统计学意义(P均<0.05)。进一步两两比较结果显示,缺血再灌注组总体表现为处理时间越长,HMGB-1免疫组化表达(平均光密度)越高,5min与15min之间差异无统计学意义,其余处理时间之间差异均有统计学意义(P均<0.001);丙酮酸乙酯组总体表现为处理时间越长,HMGB-1免疫组化表达(平均光密度)越高,5min与15min、15min与30min之间HMGB-1免疫组化表达(平均光密度)差异均无统计学意义,其余处理时间之间差异均有统计学意义(P均<0.05);HMGB-1抗体组总体表现为处理时间越长,HMGB-1免疫组化表达(平均光密度)越高,5min、15min和30min之间HMGB-1免疫组化表达(平均光密度)差异均无统计学意义,40min分别高于5min、15min和30min,差异均有统计学意义(P均<0.05)。2、Tunel肾脏细胞凋亡百分比结果:处理时间为5min时,四种处理措施之间Tunel肾脏细胞凋亡百分比差异无统计学意义,处理时间为15min、30min和40min时,四种处理措施之间Tunel肾脏细胞凋亡百分比不全相等,差异有统计学意义(P均<0.05)。进一步两两比较结果显示,处理时间为15min时,缺血再灌注组和HMGB-1抗体组的TUNEL肾脏细胞凋亡百分比均高于空白组,差异有统计学意义(P均<0.05),缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组和HMGB-1抗体组三组之间差异无统计学意义;处理时间为30min时,缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组和HMGB-1抗体组三组的TUNEL肾脏细胞凋亡百分比均高于空白组(P均<0.05),缺血再灌注组与丙酮酸乙酯组、丙酮酸乙酯与HMGB-1抗体组之间差异无统计学意义;处理时间为40min时,空白组、缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组和HMGB-1抗体组的TUNEL肾脏细胞凋亡百分比两两之间差异均有统计学意义(P均<0.001),缺血再灌注组>丙酮酸乙酯组>HMGB-1抗体组>空白组。3、肌酐值检测结果:处理时间为5min、15min和30min时,四种处理措施之间血清肌酐值差异均无统计学意义,处理时间为40min时,四种处理措施之间血清肌酐值不全相等,差异有统计学意义(P<0.001)。进一步两两比较结果显示,处理时间为40min时,空白组、缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组和HMGB-1抗体组的血清肌酐值两两之间差异均有统计学意义(P均<0.001),缺血再灌注组>丙酮酸乙酯组>HMGB-1抗体组>空白组。4、HE镜检结果:对于缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组、HMGB1抗体组来说,3组在缺血5min、15imin比较差异不是很大。在光镜下可以看到部分肾小球水肿,体积增大,毛细血管基底膜增厚,部分肾小管上皮细胞空泡变性,胞质内可见大小不一、数量不等的空泡和颗粒状物质。缺血30imin时,缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组、HMGB1抗体组的切片我们观察到管腔内出现了絮状蛋白样物质沉积和散在的细胞碎片;间质血管内不同程度充血、淤血。肾小管上皮细胞空泡变性和肾小球水肿较5imin和15min明显增多。缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组、HMGB1抗体组它们3组HE染色显微镜下观察组织病变情况相差不大。缺血40min时,肾组织损伤进一步加重,可以看到间质血管内出现了不同程度充血、淤血,局部血管周围水肿,可见粉色水肿液。缺血再灌注组、丙酮酸乙酯组和HMGB1抗体组3组光镜下观察结果比较,HMGB1抗体组肾组织病变情况好于丙酮酸乙酯组,丙酮酸乙酯组的病变情况好于缺血再灌注组。结论:1、HMGB1抗体能减轻肾缺血再灌注损伤时HMGB1蛋白的表达,减轻肾脏形态结构的病变,保护肾脏的功能。2、当肾缺血时间达30min、40min时,提前给予大鼠HMGB1抗体能显著减轻肾缺血再灌注损伤。3、当肾脏缺血时间超过30min时,HMGB1抗体减轻肾缺血再灌注损伤的作用比丙酮酸乙酯效果好。