本文从敏感动物及其特异性指标的检测方法考虑，以一种腺病毒载体疫苗Ad5-LlMP2(携带EB病毒LMP2基因的5型重组腺病毒疫苗)为代表，对其进行了系统研究，旨在为Ad5-LMP2临床研究提供安全剂量参考，确定毒性作用靶器官及毒性反应的可逆性并确定临床试验的监测指标。 采用A549细胞法检测Ad5-LMP2中的复制性腺病毒(RCA)，结果表明受试物中RCA水平小于1RCA/4×10<10>v.p.。采用MTT法和流式细胞仪检测Ad5-LMP2感染非洲绿猴肾细胞(Vero)、幼仓鼠肾细胞(BHK)和SD大鼠原代骨骼肌细胞(SMC)后导致的细胞生长抑制和死亡率，两种方法得出了较为一致的结果：高剂量(8×10<10>v.p./ml)的Ad5-LMP2对Vero细胞比对BHK和SMC细胞具有更大的细胞毒性，同时Ad5-LMP2体外转染上述细胞48 h后用荧光免疫组化法即可观察到表达于细胞膜上有LMP2蛋白表达。 急性毒性研究结果表明ICR小鼠经肌肉注射(i.m.)单次给予Ad5-LMP2的最大耐受剂量大于2.04×10<13>v.p./kg，为小鼠有效剂量的204倍。在整个试验期间，小鼠均未出现任何明显异常反应，也未出现动物死亡，给药组的平均体重也均随试验时间的延长而增加，与相应时间的对照组相同(P>0.05)。试验观察结束处死动物，肉眼观察，Ad5-LMP2给药组和对照组动物均未见给药局部和脏器异常变化，但病理检查发现，给药部位肌肉可见药物沉积，炎性浸涧，并偶见少数肌纤维钙化。小鼠肌肉注射Ad5-LMP2 14 d后仍可在肝脏和注射部位肌肉检出LMP2基因。 根据体外试验结果和囡家指导原则，选择恒河猴作为敏感动物，对Ad5-LMP2进行重复给药毒性试验，除常规检测指标外，采用PCR方法检测药物在动物体内生物分布，并结合免疫学方法检测受试物在实验动物体内的药理学活性和生物利用度。一个月内分六次给予恒河猴4.5×10<11>v.p./kg·次的Ad5-LMP2时，未见明显毒性反应；给药后定期采集的猴血清中的抗Ad5中和抗体和抗LMP2抗体均为阳性，并呈剂量-时间依赖关系，但ELISPOT检测表明，高水平的Ad5中和抗体并未影响LMP2诱导的细胞毒效应。目的基因LMP2在各主要脏器中均能被检测到，但在恢复期结束时可检测到LMP2的脏器相对减少，高剂量雄性猴对Ad5-LMP2的清除能力大于雌性猴。 综上所述，Ad5-LMP2疫苗可在体外感染灵长类和啮齿类传代或原代细胞，并成功表达目的蛋白；肌肉接种后，可以广泛地分布于机体多种组织器官中，目的蛋白能够诱导体液和细胞免疫应答，在远高于等效剂量接种时未引起实验动物明显的毒性反应，是一种安全的肿瘤预防疫苗。选择灵长类动物进行此类新药的毒理学研究，为综合评价其安全性提供临床参考更具有代表性，能够为今后腺病毒载体的毒理学研究提供敏感动物选择依据及实验数据，也为以腺病毒为载体的基因治疗方法的安全性评价提供参考。