随着生活节奏的加快和学习压力的增加,近视患病率逐年增加,近视已成为世界重大公共卫生问题。我国儿童青少年近视整体呈现低龄、高发、进展快的特点,已经严重影响了国民身体素质和国家高精尖人才需求。随着近视度数的进展,眼轴增长,巩膜后极部变薄,可出现黄斑出血、后巩膜葡萄肿等病理性近视并发症,严重者可致盲。因此,对近视的节点前移,早防早控方法的研究是近视防治的重点。目前西医治疗上主要以配戴框架镜、夜戴OK镜、低浓度阿托品点眼为主,但这些治疗存在影响美观、感染风险。阿托品滴剂在多数地区还不在医生处方内,并且存在潜在的副作用（慢性瞳孔扩张,调节能力减弱）、长期使用安全性未明,使其推广受限。因此,目前尚未有安全有效的防治手段。近视在中国古代称为“近觑”“能近怯远”等,中医认为近视因“先天禀赋不足、后天劳瞻竭视”所致,明视方是眼科医院亢泽峰团队总结的临床经验效方,前期临床观察发现其在防治近视进展中具有一定疗效,但因样本量较少无法形成循证证据,且其对近视的作用机制尚未有人阐明。因此,本研究首次采用多中心、双盲、随机对照研究证实明视方防治近视的有效性及安全性;首次采用液-质联用技术分析复方明视方所含活性成分并通过网络药理学方法初步探讨明视方防治近视的机制。研究一明视方防治儿童青少年低度近视进展的多中心、双盲、RCT研究目的:通过临床研究验证明视方防治低度近视进展有效性和安全性方法:本研究采用多中心、前瞻性、双盲、随机对照的研究方法,观察就诊于8家分中心,经检查等效球镜-3.00D≤SE≤-0.50D、年龄在7-12岁的低度近视患者。共纳入病例200,随机分为试验组和对照组,试验组给予健康宣教+验光配镜+中药明视方,对照组给予健康宣教+验光配镜+安慰剂,共治疗4个疗程。安慰剂与明视方在形状、外观、气味上无异。在干预前、12周,24周观察等效球镜、最佳裸眼远视力、眼轴、角膜曲率、调节幅度、中医证候评分,对明视方防治低度近视进展的有效性进行评价,记录研究过程中出现的不良事件及安全性指标,对患者的依从性、安全性进行评价。结果:本研究共纳入患者200例,脱落8例,本研究分析对FAS全数据集分析。1.主要疗效指标:（1）近视进展控制率:经4个疗程治疗,试验组在24周得到控制例数为53例,占比56.38%。对照组控制例数为40例,占比40.08%,两组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;（2）等效球镜半年内进展量:干预12周后,试验组平均进展量为0.00±0.72,对照组平均进展量为-0.16±0.43,两组相比不具有统计学意义（P＞0.05）。干预24周后,试验组平均进展量为-0.14±0.71,对照组平均进展量为-0.29±0.88,两组相比具有统计学意义（P＜0.05）;（3）等效球镜:①组间比较:干预12周后,试验组平均等效球镜为-1.82±0.92,对照组平均等效球镜为-2.00±0.76,两组相比不具有统计学意义（P＞0.05）。干预24周后,试验组平均等效球镜为-2.06±0.86,对照组平均等效球镜为-2.29±1.07,两组相比具有统计学意义（P＜0.05）。②组内比较:试验组与对照组的等效球镜,在干预12周及干预24周的组内分析中均具有统计学意义（P＜0.05）。2.次要结局指标:（1）最佳裸眼远视力及进展差值:①组间比较:治疗前后最佳裸眼远视力及其差值组间比较无统计学意义（P＞0.05）。②组内比较:受试者治疗前后最佳裸眼远视力组内比较均无统计学意义（P＞0.05）;（2）眼轴:①组间比较:干预12周后,试验组平均眼轴为24.11±0.78,对照组平均眼轴为24.24±0.77,两组相比不具有统计学意义（P＞0.05）。干预24周后,试验组平均眼轴为24.20±0.84,对照组平均眼轴为24.40±0.78,两组相比不具有统计学意义（P＞0.05）。②组内比较:与治疗前相比,试验组与对照组两组在干预12周及干预24周的组内对比,差异具有统计学意义（P＜0.05）;③眼轴进展量:试验组与对照组在干预24周后眼轴进展量的组间比较具有统计学意义（P＜0.05）,跟踪随访36周、48周的患者依然有意义（P＜0.05）。④眼轴增长率:试验组与对照组在干预12周及干预24周的眼轴增长率组间相比具有统计学差异（P＜0.05）;（3）角膜曲率:①组间比较:角膜曲率K1、K2在干预前、干预12周、干预24周后进行组间分析,不具有统计学意义（P＞0.05）②试验组与对照组的角膜曲率K1、K2在干预前、干预12周、干预24周后进行组内分析,不具有统计学意义（P＞0.05）;（4）调节幅度:①组间对比:两组间调节幅度在同时期（干预12周、干预24周）差异不具有统计学意义（P＞0.05）,随访至48周的调节幅度组间对比具有可比性（P=0.048＜0.05）②组内对比:干预12周后,对照组与试验组组内差异不具有统计学意义（P＞0.05）;干预24周后,两组组内前后对比差异具有统计学意义（P＜0.05）。③调节幅度增长:干预12周两组调节幅度增长差异不具有统计学意义（P＞0.05）;干预24周后两组调节幅度增长差异具有统计学意义（P＜0.05）;（5）中医证候量表:①组间对比:干预期内同时期中医证候症状组间对比均不具有统计学意义（P＞0.05）。②组内对比:除对照组“视物模糊”症状在24周时的组内对比不具有统计学意义（P＞0.05）,其余中医证候的组内对比皆有可比性（P＜0.05）;（6）一般证候量表:①单项证候:两组同时期一般证候组间比较不具有统计学意义（P＞0.05）。②证候量表总分组间比较:一般证候量表总分在试验开始前、干预12周、干预24周组间差异无统计学意义（P＞0.05）。③总分组内比较:试验组一般证候量表总分在试验开始前、干预12周、干预24周组内差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组一般证候量表总分在试验开始前、干预12周、干预24周组内差异有统计学意义（P＜0.05）。3.安全性评价研究期间,两组患者均未发现副作用、毒性反应、过敏等不良反应。治疗前后的血、尿常规,肝肾功能和心电图未见明显异常。结论:中药明视方具有控制低度近视度数进展、减缓眼轴增长、改善调节幅度、改善中医症状等作用,在控制低度近视度数进展、减缓眼轴增长、改善调节幅度方面优于单纯“健康宣教+足矫配镜”,且未见明显不良反应,表明明视方在治疗“心阳不足型”儿童青少年低度近视方面具有安全性。研究二基于液质联用技术的明视方全成分定性研究目的:使用UPLC-ESI-Q-TOF-MS方法分离鉴定中药明视方复方的活性成分方法:利用UPLC-ESI-Q-TOF-MS分析方法,基于保留时间、分子量、碎片离子结合文献和对照品对比,在正负离子双模式下,鉴定明视方的化学成分。结果:本次共鉴定出复方中194个化学成分,其中包括31个皂苷、16个三萜酸、6个口山酮、包括24个酚酸类化合物、21个二萜类化合物、9个有机酸类化合物、5个甾体皂苷、7个酚苷、26个黄酮、6个生物碱和43个其他类成分。结论:UPLC-ESI-Q-TOF-MS分析方法可快速、准确鉴定复方中复杂成分,阐明明视方中主要活性成分组成。36个成分来源于远志,22个成分来自石菖蒲,8个成分来自山药,30个成分来自人参,7个成分来自黄精,39个成分来自茯苓,42个成分来自丹参,10个成分来自天麻,为明视方的质量控制、药效物质基础和作用机制及中药新药研发提供了基础。研究三基于网络药理学的明视方防治近视机制探讨目的:运用网络药理学相关技术,对明视方防治近视的潜在靶点、通路进行分析,在分子水平探讨明视方防治低度近视的药效物质基础和可能的潜在作用机理。方法:使用第一部分所鉴定的明视方活性成分名称,在Pubchem上搜索相关化学成分的SMILES结构式。将所得SMILES结构式导入STP网站,预测活性成分的可能作用靶点。以“myopia”为关键词检索GeneCards及GAD数据库,收集与近视相关的作用靶点。使用维恩（Venn2.1）作图工具,将成分与疾病的靶点取交集,得到94个共有靶点。通过Cytoscape软件获得可视化数据。通过调整参数度值（degree）、和接近中心度（closeness）对化合物进行评估获取核心靶点。将共有靶点放入STRING11.0数据库,选择“HOMO”。参数不变,获得共有靶点联系图,将该图数据导入Cytoscape,构建蛋白-蛋白相互作用网络。将共有靶点导入DAVID数据库,进行GO富集分析,包括生物过程、分子功能和细胞组件,同时,进行靶点基因通路注释分析。并且使用Excel软件筛选将GO分析表格内PValue＜0.05的前20个结果单独提取,做成可视化图。结果:经过初筛,共收集111个化学成分的918个靶点,构建明视方活性成分-相关靶点网络,网络由1036个节点与4682条边组成。所含成分较多物质为丹参、茯苓、远志、人参、石菖蒲,其度值（degree）前10位的化学成分为是小红参醌丙（trijuganone C）、丹参庄（tanshinaldehyde）、丹参酮 ⅡB（tanshinoneⅡB）、去氢齿孔酮酸（Dehydroeburiconic acid）、山柰酚、coumaroyloctopamine穆坪马兜铃酰胺（N-trans-Feruloyl-tyramine）、木兰脂素（Magnosalicin）、N-十二烷基乙醇胺（N-lauryldiethanolamine）、猪苓酸 C Polyporenic acid C。研究收集近视相关的作用相关靶点1277个,与成分靶点取交集获得94个共同靶点,构建共有靶点-活性成分关系图;将共有靶点导入数据库构建分析PPI网络,网络共有89个节点和1216条边;以“度”（degree）、“中介中心性”（betweenness）、“接近中心性”（closeness）均大于中位数为规则,进行筛选后,得到明视方防治近视的9个核心作用靶点,分别为肿瘤坏死因子（TNF）、表皮生长因子受体（EGFR）、HRAS、血管内皮生长因子A（VEGFA）、白介素6（IL6）、雌激素受体（ESR1）、碱性成纤维细胞生长因子（FGF2）、MTOR、蛋白激酶（AKT1）。在GO分析中,BP包括蛋白质自身磷酸化、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录正调控等;细胞成分中包括核、胞质、膜、核浆、细胞质、蛋白质复合体等;MF包括蛋白激酶活性、ATP结合、蛋白结合、锌离子结合等。根据KEGG通路分析结果主要关联通路包括HIF-1信号通路、Rap1信号通路、PI3K-Akt信号通路等。将核心靶点导入数据库进行联合KEGG富集分析。以P小于0.01为筛选标准,经KEGG富集分析,获的与近视密切相关的重要通路87条。将核心靶点与87条通路导入cytoscape构建核心靶点—疾病通路网络。含90个节点和217条边,以 Dgree 降序,前五通路有 Proteoglycans in cancer、MAPK signaling pathway、Pathways in cancer、PI3K-Akt signaling pathway、Ras signaling pathway、;前三的靶点为AKT1、HRAS、EGFR。结论:（1）明视方能够干预多个近视相关基因,具有多途径、多靶点、多细胞、多通路综合作用的特点。（2）AKT1、HRAS、EGFR、VEGFA、IL6、TNF、ESR1、FGF2、MTOR、MMP-2 靶点可能是明视方防治近视的重要靶点,其作用机制可能是通过PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路、VEGF信号通路、雌激素信号通路、mTOR信号通路、cAMP信号通路、TGF-β信号通路、MAPK信号通路、Ras信号通路、Rap1信号通路等影响巩膜外基质降解,影响巩膜重塑、抗炎、调控视锥细胞分化、影响视觉蛋白合成来防治近视。