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目的:本试验以感染绵羊肺炎支原体(MO)的绵羊为疾病模型,使用重组BPI蛋白(r BPI)治疗感染MO的盘羊杂交羊,然后用real-time QPCR与ELISA的方法,测定BPI和相关细胞因子的含量,用血常规方法检测血液各项生理指标,以研究r BPI对感染MO的盘羊杂交羊的免疫调节效果。方法:(1)绵羊肺炎支原体的人工感染:将冻存的MO菌种进行复壮培养,测定菌液浓度并稀释到备用浓度106CCU/m L。然后将6只巴什拜羊为A组,12只盘羊杂交羊随机分为B、C组,全部气管内注射绵羊肺炎支原体,每天观察临床症状并测量记录体温。两周后每组随机取3只试验羊的鼻腔分泌物,进行MO的培养与生化鉴定,检测人工感染情况。(2)r BPI对感染MO的盘羊杂交羊的治疗作用:在试验的第4 d,C组杂交羊使用纯化的r BPI对其治疗,150mg/只/天,而A组和B组每天注射生理盐水,继续观察临床症状并记录体温。实验结束后将所有羊解剖观察肺脏病理变化,并制作病理切片进行病理评分,对比各组羊的差别。(3)r BPI对感染MO的盘羊杂交羊的内源BPI m RNA水平的影响:分别在感染前(0 d)、感染后第二天(2 d)、感染后五天(5 d)、一周(7 d)、两周(14 d)、三周(21 d),采血分离嗜中性粒细胞,用real time-QPCR方法检测试验羊BPI m RNA的相对表达水平。(4)r BPI对感染MO的盘羊杂交羊的免疫调节作用:分别在第0 d、1 d、5 d、7 d、14 d、21 d,采血分离血清,用ELISA方法检测试验羊IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α及IFN-γ的含量,比较各组羊细胞因子的表达变化差异。(5)r BPI对感染MO的盘羊杂交羊的血液部分生理指标测定:分别在第0 d、7 d、14 d,采集各组羊的外周血进行血常规检测。结果与结论:(1)鼻腔分泌物用支原体专用培养基培养5d培养液变黄,葡萄糖发酵试验显示培养液由红变黄呈阳性;水解精氨酸试验显示培养液未变色呈阴性;洋地黄皂苷试验显示抑制带>0.3cm为阳性;氯化四氮唑还原实验显示琼脂培养基呈红色;红细胞吸附试验显示菌落表面布满红细胞,溶血试验为β溶血。说明鼻腔分泌物中含有MO,试验羊人工感染成功。(2)A组巴什拜羊在感染后2-3d均表现为食欲减退、体温一过性升高(40-41℃)、呼吸啰音,无死亡病例,剖检后肺表面有轻微出血点;B组杂交羊体温升高(40-41℃)持续较久,有咳嗽、流浆液性鼻涕,甚至严重呼吸啰音及腹泻症状,其中2只死亡,剖检肺表面有不同程度的粉色肉变和肝变,有出血点和出血斑。C组杂交羊起初体温升高、食欲减退、咳嗽症状,剖检肺表面有出血点和出血斑。组织病理学评分结果:A组平均分为9.4,B组平均分19.9,C组平均分为12.8,B组评分显著高于A、C组(P<0.05;P<0.05)。说明杂交羊在治疗后临床症状及肺部炎症减轻。(3)在第7 d,C组BPI基因的相对表达水平显著低于A、B组(P<0.05),在第14-21d C组极显著高于B组(P<0.01),而在第7-14 d A组极显著高于B组(P<0.01)。说明了注射r BPI对体内BPI的表达水平有影响。(4)从感染后的第7-21d,C组的IL-1β含量分别极显著低于A、B(P<0.01)。在感染后的第7-21 d,C组IL-4含量分别极显著高于对照组A、B(P<0.01);在第14-21d,A组IL-4显著高于B组(P<0.05)。第14-21 d,C组的IL-6极显著低于A、B组(P<0.01),A组也显著低于B组(P<0.05)。在感染后第7 d,C组IL-8浓度显著低于A组(P<0.05);在第14-21d,B组的极显著高于A组(P<0.01;P<0.01)。在第5 d,C组IL-10显著高于A组(P<0.05),极显著低于B组(P<0.01);在第14 d,C组极显著低于A组(P<0.01),显著高于B组(P<0.05);在第21 d,C组显著低于A组(P<0.05),极显著高于B组(P<0.01)。在第14 d,C组IFN-γ含量显著高于A组(P<0.05);在第21 d,C组显著低于B组(P<0.05),但极显著高于A组(P<0.01)。在感染第14 d,C组TNF-α显著低于B组(P<0.05),显著高于A组(P<0.05);在第21 d,C组的TNF-α显著低于B组(P<0.05),但极显著高于A组(P<0.01)。(5)在感染前,杂交羊WBC、LYM、LYM%、RBC显著高于巴什拜羊,而MID、MID%、MCHC低于巴什拜羊。注射r BPI后,在第14 d,C组WBC、GRAN(109/L)及GRAN%显著低于B组(P<0.05),而LYM%、MCHC显著高于B组(P<0.05)。说明注射BPI对杂交羊的血液生理指标有一定影响。