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目的:
研究中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)四川分库中四川籍汉族人群MICA等位基因分布特点及其与HLA组成的单倍型特点。并初步估计四川造血干细胞移植供受者之间可能存在的MICA位点错配情况。
方法:
从四川骨髓库2008年12月-2009年11月街头采集的600余份川籍汉族无关志愿者样本中,随机选择119(人)份,这些样本均已完成HLA-A/B/DRB1高分辨分型;从四川省脐带血造血干细胞库HLA临床检测室选取10例已完成HLA-A/B/DRB1低分辨分型,等待造血干细胞移植治疗的血液病患者标本。分别采用PCR—SBT和PCR—SSP技术,对MICA基因第2—6外显子测序分型和MICA基因缺失型(MICA*Del)检测。应用直接计数法计算MICA各等位基因频率;应用卡方检验比较MICA等位基因在不同人群中的分布差异;应用ARLEQUIN3.5.1.2软件对该群体HLA-B/MICA2位点连锁不平衡分析和单倍型频率计算以及HLA-A/B/MICA/HLA-DRB14位点单倍型频率计算。
结果:
共检测到13种已知MICA等位基因和2种新的MICA等位基因。其中以MICA*010(25.2%)最常见,其次为MICA*F008:01/04(23.1%),MICA*002:01(16.0%),MICA*019(10.5%),MICA*012:01(8.8%),MICA*049(4.2%)和MICA*009:01(3.8%),这7种等位基因占所检出MICA等位基因的91.6%。与浙江汉族相比,仅MICA*027分布存在统计学差异,与内蒙古汉族、韩国人、美国白人及非洲裔美国人相比,有5—11种不同MICA等位基因分布存在统计学差异。四川骨髓库汉族与上述5个群体间总体分布均存在统计学差异。本研究发现3例2种新的MICA等位基因,被世界卫生组织HLA因子命名委员会分别命名为MICA*064N和MICA*010:02。与MICA*064N序列最为相似的是MICA*027,二者仅存在801位G>A碱基取代,导致编码胞外α3结构域的244位密码子由色氨酸(UGG)密码子变成了终止密码子(UGA);与MICA*010:02序列最为相似的是MICA*010,二者仅存在933位T>C碱基取代,该碱基突变为同义突变。连锁不平衡分析发现,四川骨髓库汉族人群中B*1301-MICA*045,B*4801-MICA*Del紧密连锁;A*0207-B*4601-MICA*010-DRB1*0901为最常见的4位点单倍型。对于等待造血干细胞移植治疗的血液病患者,连锁不平衡分析提示携带HLA-B*5201患者有必要做MICA位点配型;携带HLA-B*40-MICA*027患者,在四川骨髓库汉族人群中寻找到MICA位点匹配的供者可能性较小。
结论:
建立了MICA等位基因分型方法,并提出了疑难样本的解决策略。四川骨髓库汉族人群MICA等位基因表现出较丰富的多态性,具有自身的特点。