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目的:
Vincent BH等人发现C57BL/6小鼠的垂体、甲状腺、骨髓组织中表达一种TSHβ剪接变体,它的转录起始于第4内含子3’端的27个碱基,因此它缺少第4外显子,含有第5外显子的全部编码区。随后Jeremy S等又报道了人的垂体、外周血和甲状腺中也同样表达TSHβ剪接变体。它和小鼠的TSHβ剪接变体很相似,含有内含子2的27个核苷酸和第3外显子全部编码区。它是首次被发现含有部分内含子的TSHβ剪接体,并体外实验初步证实小鼠的TSHβ剪接变体具有生物学活性。但是,目前为止,对于它的表达部位、生理及病理学意义还不清楚。我们在确认TSHβ剪接变体在Balb/c小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血和淋巴结中表达的情况下,利用LPS制备小鼠内毒素性全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)模型,通过检测TSHβ剪接变体在垂体、甲状腺、骨髓、脾组织中的表达变化,探讨机体发生感染时TSHβ剪接变体对调节循环中甲状腺激素水平的作用。
方法:
本实验首先选择36只雌雄各半的Balb/c小鼠,7-8周龄,随机分为6组,每组6只,分别为:0h组,6h组,12h组,24h组,48h组,72h组。0h组:腹腔注射生理盐水;其它各组均经腹腔注射LPS,3mg/kg体重。根据设置的时间组,于注射后取动物全血,采用RIA法和ELISA法分别检测小鼠血清中甲状腺激素和促甲状腺激素水平。
使用PCR技术对TSHβ剪接变体在Balb/c小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血、淋巴结中表达进行检测,并对甲状腺该基因的扩增产物进行测序。用SYRRGREEN实时荧光定量PCR法分析不同处理时间下TSHβ剪接变体基因mRNA表达。
结果:
0h血清TT4水平为24.5875nmol/L,与其相比其它各组均下降(P<0.01),24h下降最明显为9.3283nmol/L,48h开始回复,直至72h为18.696nmol/L仍未回复到正常水平。TSH水平没有明显变化。
PCR结果显示垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血、淋巴结中表达TSHβ剪接变体,但除垂体外其它组织都不表达天然型TSHβ。
骨髓中TSHβ剪接变体表达于6h,12 h,24h较0h下降,48h恢复正常,0h为(1.000±0.000),6h为(0.511027±0.10390)(p<0.01),12h为(0.36788±0.06024)(p<0.01),24h为(0.198357±0.03266)(p<0.01)。甲状腺中TSHβ剪接变体表达于6h较0h升高,0h为(1.000±0.000),6h为(10.43319±4.86834)(9<0.01)。其它各时间点较0h比较甲状腺中TSHβ剪接变体表达均没有统计学意义。垂体中TSHβ剪接变体及天然型TSHβ表达各时间点均未见明显变化。
结论:
1.PCR结果显示Balb/c小鼠的垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血、淋巴结组织中均表达TSHβ剪接变体,但天然型TSHβ仅在垂体中表达。
2.腹腔注射LPS(3mg/kg体重)可降低循环中甲状腺激素水平,但对TSH没有显著影响。
3.LPS使Balb/c小鼠甲状腺组织中TSHβ剪接变体mRNA的表达明显升高,但LPS抑制骨髓TSHβ剪接变体mRNA的表达,提示TSHβ剪接变体参与炎症反应过程,在免疫-内分泌网络调节中有重要作用,免疫系统来源的TSHβ剪接变体的生理病理学作用和调节机制有待进一步研究。