孕马血清促性腺激素（PMSG）是一种非常重要的糖蛋白激素,能够促进动物的发情、排卵等,被广泛应用于畜牧业领域。目前对于PMSG激素的研究多集中于从孕马血清中对PMSG激素进行提纯,而对N-糖基化及糖链结构的研究较少。已有大量研究表明,N-糖基化是生物体中普遍存在的一种蛋白质翻译后修饰,对于蛋白质的生物活性具有重要影响。因此,本课题以PMSG糖蛋白为研究对象,对其糖基化位点及糖链结构进行解析,以期为理解PMSG糖蛋白生物活性提供参考。本课题的主要研究成果如下:1、λ-Carr-Ag-SA纳米复合材料的制备及富集性能评估。由于糖蛋白酶解后糖肽含量较低,且糖肽离子化效率较低,因此有必要在质谱分析之前对糖肽进行富集。本课题采用卡拉胶和海藻酸钠通过一步原位还原银离子,合成了一种新型的纳米复合材料λ-Carr-Ag-SA,并采用标准蛋白和人血清作为实验对象对其富集性能进行了评估。结果表明,采用λ-Carr-Ag-SA对糖肽进行富集后,质谱所检测到的糖肽个数及信号强度都得到了显著提升。因此,本研究为N-糖肽富集提供了一种新的研究策略。2、PMSG糖蛋白N-糖肽富集及糖链结构解析。本研究首先对三种不同纯化阶段的PMSG糖蛋白样品进行前处理,通过优化色谱、质谱条件,建立了PMSG肽段序列的高分辨质谱解析方法。基于该方法,本研究分别对未富集与富集后的PMSG糖蛋白酶解溶液进行解析,并根据糖肽的氧鎓离子及Y0（peptide）、Y1（peptide+1Hex NAc）或Y2（peptide+2Hex NAc）等对谱图进行筛选,最终分别获取了4个和11个PMSG的N-糖肽序列以及糖链结构信息。相较于未富集的情况下,富集后的N-糖基化结构信息更加丰富,而且信号强度也得到大幅提升。3、基于不同碰撞能量下的PMSG糖蛋白N-糖基化位点进一步验证。由于在不同高能诱导碰撞解离（HCD）碰撞能量的情况下,会导致完整糖肽在糖苷键、多肽骨架的碎裂方式有所不同,而当前获取的糖肽二级谱图中,肽骨架离子信号较少。为了进一步验证糖基化位点,本研究基于建立的高分辨质谱解析方法,通过改变不同的HCD的碰撞能量（NCE）,分别对富集的PMSG糖蛋白的完整N-糖基化肽段进行解析。通过对比实验结果,最终确定了PMSG的两个N-糖基化修饰位点（分别为PMSG蛋白α亚基上的Asn 80和PMSG蛋白β亚基上的Asn 33）,为进一步探究PMSG糖蛋白生物活性提供了实验依据。