第一章不同镇痛药对肝癌细胞生物学行为影响目的：探讨不同镇痛药（吗啡、布洛芬、塞来昔布、氯胺酮）对肝癌细胞生物学行为影响。方法：人肝癌QGY-7703细胞培养至对数生长期,分别接种于培养板或25cm2培养瓶中。采用随机数字表法,将两种细胞分别随机分为13组（n=6）：不同浓度布洛芬组（IB,-3组）布洛芬终浓度分别为250 umol/L、500 umol/L、 1000umo1/L;塞来昔布组（CE1-3组）：塞来昔布终浓度分别为25umol/L、 50umol/L.100umol/L;吗啡组（M01₃组）：吗啡组终浓度分别为0.01umol/L、 10umol/L、1000umol/L；氯胺酮组（KE1-3组）：氯胺酮终浓度分别为100umol/L、 500umol/L、1000umol/L;以及正常对照组（C组）：加入等容量的RPM-1640培养基。分别于孵育24、48和72h时,采用cck-8法测定各组细胞增殖抑制率。于孵育48h后,用流式细胞术检测各组细胞凋亡率及其周期情况；采用利用Transwell小室检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果：与C组比较,IB1-3组、CE1-3组、MO1-3组和KE1-3组等十二组细胞的增殖抑制率均依次升高,且依照药物作用的浓度和时间的增加而依次升高,具有浓度和时间的依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。与C组比较,IB1₃组、CE1₃组、M01-3组和KE1₃组等十二组细胞迁移和侵袭能力均降低,且依照药物作用的浓度的增加而依次降低,具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。与C组比较,IB1-3组、CE1-3组、M01-3组和KE1-3组等十二组细胞凋亡率均增加,且依照药物作用的浓度增加而依次增加,具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。与C组比较,IB,₃组、CE1-3组和MO,-3组等九组细胞的G1期细胞百分比均升高,S期和M期细胞百分比均降低,且依照药物作用浓度的增加而依次变化,具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）；KE1-3组细胞的G1期和S期细胞百分比均升高,M期细胞百分比均降低,且依照药物作用的浓度的增加而依次变化,具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。结论布洛芬、塞来昔布、吗啡和氯胺酮均可以抑制人肝癌QGY-7703细胞的增殖,并可降低肝癌QGY-7703细胞的侵袭和迁移的能力,可能与其促进细胞的凋亡并使细胞周期发生阻滞有关。第二章 布洛芬抑制肝癌细胞生长的机制研究目的：探讨PI3K/Akt/mTOR通路和IKKβ/IκBα/NF-κB通路在布洛芬抑制肝癌细胞生长中的作用。方法：取对数生长期人肝癌细胞QGY-7703,采用随机分为两组,对照组（C组）：加入等容量的RPM-1640培养基；实验组（IB组）：按照不同布洛芬作用浓度分为三个亚组：IB1组（布洛芬作用浓度为250umol/L）, IB2组（布洛芬作用浓度为500umol/L）、IB3组（布洛芬作用浓度为1000umol/L）。各组分别作用48后,采用Real-TimePCR测各组细胞中IKKβ、Bcl-2、PI3K、 PTEN和MMP-9基因表达的变化。用Western blot检测各组细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路和IKKβ/IκBα/NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果：1. PI3K/Akt/mTOR信号通路相关因子与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组三组细胞PTEN mRNA和PTEN蛋白表达明显升高,且随着布洛芬作用浓度的增加依此升高,具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）；与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组三组细胞PI3K mRNA、Akt蛋白和mTOR蛋白的表达量均无明显差异（P>0.05）；与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组等三组细胞MMP-9 mRNA和MMP-9蛋白的表达以及p-Akt、p-mTOR蛋白的表达均显著下降,且随着布洛芬作用浓度的增加依此降低,具有良好的浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。2. IKKβ/IκBα/NF-κB信号通路相关相关因子表达的结果与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组三组细胞IKKβ mRNA和Bcl-2mRNA表达明显下调,且依照布洛芬作用浓度的增加而依次下调,具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）；与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组三组细胞IKKβ、Bcl-2、p-IKKβ、p-IκBα和NF-κ Bp65蛋白的表达明显下调,且随着布洛芬作用浓度的增加依此降低,具有良好的浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：布洛芬对QGY-7703细胞生长的抑制可能与其对细胞PI3K/Akt/mTOR和IKKβ/IκBα/NF-κB信号通路的调控有关。第三章镇痛药物处理后肝癌QGY-7703细胞差异表达基因的筛选目的：探究镇痛药（塞来昔布、吗啡和氯胺酮）抑制肝癌QGY-7703细胞生长的机制方法：取对数生长期的细胞,采用随机数字表法,将细胞随机分为4组（n=3）:QGY-7703细胞分为：塞来昔布组（CE组）：塞来昔布作用浓度为50umol/L;吗啡组（MO组）：吗啡作用浓度为10 umol/L;氯胺酮组（KE组）：氯胺酮作用浓度为500umol/L;对照组（C组）加入等容量的RPM-1640培养基。各组培养48h后,采用全基因组表达谱芯片,筛查镇痛药物（塞来昔布、氯胺酮和吗啡）处理后QGY-7703细胞差异表达基因,并进行生物信息学功能和通路分析。结果：与C组相比,在CE组细胞中有141个基因表达增加,50个基因表达下降；而在KE组中有1032个基因表达增加,899个基因表达下降；而在MO组中有766个基因表达上升,311个基因表达下降。其中KE组和CE组两组共同调控基因有34个；KE组和MO组两组共同调控基因195个；MO组和CE组两组共同调控18基因个；KE组、CE组和MO组三组共同调控基因17个。生物学通路分析显示：与C组相比,CE组差异基因主要涉及应急、细胞的负性调节、生物大分子代谢等方面,参与PPAR信号通路、MAPK信号通路、mTOR信号通路等的改变；KE组差异基因主要涉及细胞周期、RNA的代谢等方面,参与溶酶体、基因的剪接与复制相关通路和P53信号通路等通路的改变；MO组差异基因主要涉及生物代谢、转运、RNA的代谢等方面,参与抗原的加工和提呈、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等相关通路、MAPK信号通路等通路的改变结论：本研究成功筛选出镇痛药（塞来昔布、吗啡和氯胺酮）处理后人肝癌QGY-7703细胞差异表达的基因,生物信息学功能和通路分析显示镇痛药抑制QGY-7703细胞的生长涉及了不同的基因和通路,为探讨镇痛药抗肝癌的作用提供了有效线索并具有一定的指导意义。