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目的:本次研究的目的是建立小鼠哮喘模型,检测哮喘小鼠相关炎症细胞和分子的变化,探讨日本血吸虫热激蛋白60(HSP60)来源多肽(SJMHE1)抑制哮喘小鼠炎症反应的机制。方法:1.选择品系为BALB/c的雄性小鼠,6-8周龄,体重18-22g,采用双盲法,将小鼠随机分为四组,根据干预条件,将各组命名为:PBS组、OVA组、OVA+PBS组和OVA+SJMHE1组。使用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立小鼠哮喘模型,给予小鼠腹腔注射OVA,1周1次,共注射3次进行致敏。注射最后一剂OVA后间隔一周开始予小鼠2.5%OVA溶液雾化,每日1次,每次1h,连续雾化一周。PBS组小鼠用PBS腹腔注射及雾化。在第0、14和21天,分别予OVA+PBS组和OVA+SJMHE1组小鼠皮下注射PBS和SJMHE1乳化液。在最后一次雾化..次日处死所有小鼠。2.用HE和PAS染色,评估小鼠肺组织炎症反应程度。用PBS灌洗小鼠右肺,行肺泡灌洗液细胞计数和分类计数。取小鼠眼球血,用ELISA法检测小鼠血清中Ig E水平。3.制备小鼠脾脏单个细胞悬液,用流式细胞术检测小鼠脾脏相关Th细胞比例。4.用荧光定量PCR法检测小鼠肺组织相关转录因子和细胞因子以及lnc RNA MALAT1和mi R-155的相对表达量。5.用蛋白印迹法检测小鼠肺组织P-STAT3、P-STAT5、SOCS1蛋白在各组间的表达趋势。6.取6-8周龄雄性BALB/c小鼠脾脏,在无菌条件下,用细胞分选试剂盒分选小鼠脾脏CD4+T细胞。用活化CD4+T细胞24h后,用慢病毒转染,上调和下调CD4+T细胞内mi R-155的表达。用含SJMHE1的1640完全培养基刺激转染后的细胞。7.在转染病毒72-96小时后,用荧光显微镜观察细胞荧光表达情况,评估转染效率。用荧光定量PCR法检测mi R-155、lnc RNA MALAT1、SOCS1 m RNA的表达情况。在用SJMHE1干预成功转染慢病毒的CD4+T细胞后,用流式细胞术检测各组细胞中CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞和CD4+IL-17+Th17细胞的比例,以及P-STAT3和P-STAT5的表达情况。结果:1.与PBS组相比,OVA组小鼠在雾化后期出现明显的急性哮喘发作现象,肺组织炎症浸润明显,肺泡灌洗液细胞总数增多、中性及嗜酸性粒细胞增多。而OVA+SJMHE1组小鼠肺组织炎症浸润较OVA组明显减轻,肺泡灌洗液细胞总数减低,中性及嗜酸性粒细胞数显著减低。2.流式细胞结果显示,与PBS组小鼠相比,OVA组小鼠脾脏CD4+IL-4+Th2细胞和CD4+IL-17+Th17细胞比例显著增高,CD4+IFN-γ+Th1细胞比例明显减低,CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞减低不明显;OVA+SJMHE1组较OVA组,CD4+IL-4+Th2细胞和CD4+IL-17+Th17细胞比例显著减低,CD4+IFN-γ+Th1细胞和CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞比例明显增高。3.与PBS组相比,OVA组小鼠肺组织GATA3、T-bet、FOXP3相对表达量显著减低,ROR-γ相对表达量显著增高。与OVA组相比,经SJMHE1干预的小鼠肺组织GATA3和ROR-γt相对表达量减低,而T-bet和FOXP3升高。4.与PBS组相比,OVA组小鼠肺组织2型细胞因子和IL-17相对表达量升高,IFN-γ、IL-12p35和TGF-β表达量减低;与OVA组相比,经SJMHE1干预后,2型细胞因子表达减低,IL-10、IL-12p35和IFN-γm RNA表达升高。5.与PBS组相比,OVA小鼠肺组织lnc RNA MALAT1表达减低,mi R-155表达升高;与OVA组相比,经SJMHE1干预的小鼠肺组织lnc RNA MALAT1表达升高,mi R-155表达减低。6.蛋白印迹结果显示,与PBS组相比,OVA组SOCS1和P-STAT5表达下调,P-STAT3表达上调;经SJMHE1干预后,SOCS1和P-STAT5表达上调,P-STAT3表达下调。7.CD4+T细胞感染上调mi R-155的慢病毒后,lnc RNA MALAT1表达减低,CD4+IL-17+Th17细胞和CD4+P-STAT3+细胞比例升高,CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞和CD4+P-STAT5+细胞比例无明显变化。CD4+T细胞感染抑制mi R-155的慢病毒后,CD4+IL-17+Th1和CD4+P-STAT3+细胞比例,以及CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞和CD4+P-STAT5+细胞比例较对照组无明显差异。8.SJMHE1处理感染了上调mi R-155的CD4+T细胞后,CD4+IL-17+Th17细胞和CD4+P-STAT3+细胞比例减低,CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞和CD4+P-STAT5+细胞比例升高。结论:1.哮喘小鼠存在Th1、Th2、Th17、Treg细胞失衡;Th细胞相关转录因子、细胞因子表达异常,Th细胞失衡参与哮喘小鼠肺组织炎症的发生;2.SJMHE1可通过调节哮喘小鼠脾细胞中Th细胞平衡、调节哮喘小鼠肺组织中Th细胞相关转录因子、细胞因子的表达,调节哮喘小鼠的气道炎症;3.SJMHE1可调节哮喘小鼠肺组织中mi R-155、lnc RNA MALAT1、SOCS1、P-STAT5、P-STAT3的表达;4.SJMHE1可通过mi R-155调节小鼠CD4+T细胞中lnc RNA MALAT及STAT3、STAT5的表达,调节CD4+T细胞中Th17、Treg细胞比例,可能参与对哮喘小鼠气道炎症的调节。