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目的:揭示中药清热利湿饮对HaCaT细胞增殖抑制、诱导凋亡及表达IL-6mRNA、IL-8mRNA、IL-10mRNA的作用机制,为清热利湿饮治疗寻常型银屑病提供科学理论依据。方法:以角质形成细胞HaCaT细胞为研究对象,进行传代培养,分别采用MTT法、流式细胞仪技术、RT-PCR技术及ELISA技术观察中药清热利湿饮提取液对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞增殖抑制作用、诱导凋亡作用、对细胞周期的影响、表达IL-6mRNA、IL-8mRNA和IL-10mRNA和分泌IL-8和IL-10的影响。结果:1.TNF-α对HaCaT细胞增殖效应的影响TNF-α对HaCaT细胞作用24h、48h和72h,对HaCaT细胞有一定的增殖效应,在TNF-α作用72h浓度为2.5×105u/L时与无TNF-α细胞对照相比,其增殖率为14.11%,本研究选择TNF-α2.5×105u/L作为对HaCaT细胞的诱导剂量。2.三种中药提取液对HaCaT细胞增殖抑制效应的比较清热利湿饮全方①、拆方②和拆方③提取液在不同浓度(3.1g/L-100g/L)和不同时相(24h、48h和72h)对经TNF-α诱导的HaCaT细胞有一定的增殖抑制效应。清热利湿饮全方①与拆方②和拆方③提取液相比,不同药物浓度对HaCaT细胞增殖的抑制效应明显高于后二者,差异均具有统计学意义(P<0.05),本研究选择清热利湿饮提取液对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞的增殖抑制效应做进一步探讨。3.不同浓度的清热利湿饮对TNF-α诱导的HaCaT细胞的增殖抑制效应的影响药物作用48h与MTX阳性对照相比,清热利湿饮在12.5g/L时对HaCaT细胞的抑制率为40%,高于MTX(38.76%),在25g/L~100g/L三个浓度,其抑制效应与MTX相比明显升高,差异显著(P<0.05或P<0.01)。4.清热利湿饮对HaCaT细胞凋亡的影响HaCaT细胞经浓度分别为12.5g/L、10g/L、7.5g/L和5g/L清热利湿饮提取液作用48h后细胞凋亡总数分别为45.75%、44.94%、36.26%和34.43%,TNF-α诱导活化无药对照组仅为24.65%,前者高于后者,差异显著(P<0.05和P<0.01)。5.清热利湿饮对HaCaT细胞周期的影响MTX作用于HaCaT细胞48h,G1期细胞为65.94%,正常对照和TNF-α对照组分别为49.01%和50.73%,而S期前者为30.38%,MTX将细胞阻滞于G1期。清热利湿饮在12.5g/L和15g/L时,G1期细胞与TNF-α组相比细胞明显减少(38.06%和25.04%),S期细胞明显增加(56.98%和67.90%),MTX将HaCaT细胞阻滞于G1期,而清热利湿饮提取液则将其阻滞于S期。6.清热利湿饮对HaCaT细胞表达IL-6mRNA、IL-8mRNA和IL-10mRNA的影响清热利湿饮对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞产生的炎性细胞因子IL-6mRNA和IL-8mRNA的表达有下调作用,在10g/L和12.5g/L时对IL-10mRNA的表达量增强较为明显,与TNF-α诱导活化组相比,差异有显著性(P<0.05和P<0.01)。7.清热利湿饮对HaCaT细胞分泌IL-8和IL-10的影响清热利湿饮对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞可降低IL-8的分泌,但对IL-10的影响不明显。结论:中药清热利湿饮对HaCaT细胞增殖有明显的抑制作用,且在一定浓度范围内其抑制率呈明显的时间和剂量依赖性;作用于HaCaT细胞后均可诱导其凋亡;干扰HaCaT细胞周期,将细胞阻滞于S期;下调IL-6mRNA、IL-8mRNA的表达,IL-10mRNA的表达随药物浓度的升高而增强;可降低IL-8的分泌,但对IL-10的影响不明显。提示中药清热利湿饮治疗银屑病的机制可能与此有关。