【摘 要】
：
活化的T细胞是机体杀伤肿瘤细胞的主要效应细胞。PD-1表达于激活的T细胞表面,与肿瘤表面的PDL-1\PDL-2结合,发挥负性调节作用,抑制T细胞增殖。PD1单克隆抗体治疗,虽然对某些肿瘤有一定的疗效,但对大多数肿瘤而言,并不能完全阻止肿瘤恶化,甚至由于副作用的存在而不得不停止使用,原因之一是因为肿瘤微环境中缺少能够表达干扰素-γ（IFN-γ）的树突状细胞（DC）,导致T细胞的激活受阻。因此,在体
论文部分内容阅读
活化的T细胞是机体杀伤肿瘤细胞的主要效应细胞。PD-1表达于激活的T细胞表面,与肿瘤表面的PDL-1\PDL-2结合,发挥负性调节作用,抑制T细胞增殖。PD1单克隆抗体治疗,虽然对某些肿瘤有一定的疗效,但对大多数肿瘤而言,并不能完全阻止肿瘤恶化,甚至由于副作用的存在而不得不停止使用,原因之一是因为肿瘤微环境中缺少能够表达干扰素-γ（IFN-γ）的树突状细胞（DC）,导致T细胞的激活受阻。因此,在体外激活并大量增殖活化的被抑制了PD1表达的T细胞,预期可以大大提高对肿瘤的杀伤效应。CRISPR-Cas9技术是新近发现的基因编辑技术,可以有效的敲除或敲入基因。CIK/CD3AK等均是活化的T细胞,其表面也有PD1受体的高表达,而此两种活化T细胞具有非MHC限制的杀肿瘤细胞特性,应用CRISPR-Cas9技术敲除其表面的PD1受体是非常有意义的研究。本文针对此问题,采集外周血T细胞,在体外通过不同的因子组合活化增殖成CIK/CD3AK等活化的T细胞,应用CRISPR-Cas9技术构建PD-1重组质粒,利用慢病毒介导转染入CIK/CD3AK等活化T细胞,抑制其表面PD-1的表达,采用流式细胞法检测其对活化T细胞PD1的抑制效率;采用逆转录聚合酶链反应和Western blot法检测干扰后CIK/CD3AK细胞PD-1蛋白的表达;流式细胞法检测MCF-7和MCF-7adr细胞表面PD-L1的表达。在体外将CIK/CD3AK等活化的T细胞和敲除PD-1后的CIK/CD3AK细胞与PDL-1表达率不同的乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7adr细胞共培养,采用CCK-8法测定各组活化T细胞对不同乳腺癌细胞的杀伤率。然后进一步建立乳腺癌的裸鼠模型进行验证,由尾静脉分别注入CIK/CD3AK等活化的T细胞和抑制PD-1表达的活化T细胞,观察各组细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。结果发现利用CRISPR-Cas9技术构建PD-1重组质粒可有效抑制活化T细胞PD-1的表达,培养14、21天乳腺癌患者自体血CD3AK细胞PD-1表达率分别为44.13%,60.18%,而抑制各组PD-1表达率分别为15.35%,13.98%（P＜0.01）;培养14天、21天乳腺癌患者自体血CIK细胞PD-1表达率分别为50.54%,74.50%,而抑制各组PD-1表达率分别为16.02%,14.36%（P＜0.05）。RT-PCR结果显示lentiviral vector/PD-1使CIK和CD3AK细胞PD-1基因表达水平降低;CCK8结果显示培养第14、21天的空白质粒组和PD-1质粒组对MCF-7/adr细胞的杀伤率分别为42.98%/62.68%和47.22%/66.95%（P＜0.01）;培养第14天的空白质粒组和PD-1质粒组CIK细胞对MCF-7细胞的杀伤率分别为58.78%和68.14%。荷瘤裸鼠体内实验表明,PD-1质粒组CD3AK细胞能够显著抑制肿瘤的生长,其抑瘤率可达74.8%,高于空白质粒组的53.4%。综上所述,活化的T细胞（CIK/CD3AK）表面高表达PD-1,用CRISPR-Cas9技术构建PD-1重组质粒可有效抑制活化T细胞PD-1的表达;MCF-7/adr细胞表面高表达PD-L1,抑制PD1的表达可有效提高CIK/CD3AK细胞对乳腺癌细胞的杀伤能力。
其他文献
目的:通过使用甲磺酸阿帕替尼对晚期乳腺癌患者进行治疗,分析患者治疗后的治疗效果及不良反应发生情况,以此来探究甲磺酸阿帕替尼在晚期乳腺癌患者中的治疗价值,为其日后在临床中的应用提供有效的依据。方法:研究选取了于2015年1月～2016年1月滕州市中心人民医院肿瘤科收治的58例晚期乳腺癌患者作为研究对象,采取随机数字表法对所有患者进行分组,试验组和对照组各29例。试验组使用甲磺酸阿帕替尼进行治疗,对照
目前,国内外以玉米蛋白为原料制备玉米蛋白发泡粉的方法主要有碱法、酶法。法虽然简单易行,却存在着许多难以克服的不足。本研究采用全新的酶法制取玉米蛋白发泡粉,解决了水解时间长、效率低、水解程度难以控制、收率低等问题,同时又能大幅度降低产品灰分含量和色泽,提高产品质量。具体研究内容如下:1.采用双酶法处理玉米黄粉,进行单因素试验及双酶间的正交试验得出:先用纤维素酶处理,再采用α-淀粉酶处理,得到浅黄色的
普拉曲沙（Pralatrexate）,又称弗龙替尼（Folotyn）用于治疗复发性、顽固性外周T细胞淋巴肿瘤。普拉曲沙2009年9月已经在美国经FDA批准上市,而在国内还没有该药上市的有关报道。根据国外文献所报道的普拉曲沙的生产工艺,条件非常苛刻,难以同工业化大生产相协调。因此,针对普拉曲沙药物之合成的新工艺,促使其适合工业化之大生产,就显得非常关键了。本论文的重点是对普拉曲沙合成新工艺进行设计。
乙型肝炎病毒（HBV）感染是目前全球最为严重的病毒性疾病之一,尤其在我国,乙肝感染的慢性患者占全世界总患者的1/3,而目前这一疾病缺乏特效药物治疗,现有的药物具有副作用强或长期用药容易产生耐药性。造成抗乙肝药物研制缓慢的一个重要原因就在于缺乏合适的动物模型,尤其是缺乏模拟慢性乙肝感染的小鼠模型。本研究利用最新的rAAV-HBV重组病毒,尝试建立一个适合于药物筛选的HBV小鼠模型。我们通过尾静脉将重
本研究以咖啡酸衍生物为研究对象,通过对咖啡酸脂类衍生物和咖啡酸酰胺衍生物的合成方法分析,以此来明确影响其合成效果的主要因素,总结不同衍生物产生的降血糖药理作用。利用化学合成法分别合成了肉桂酸苯乙酯、咖啡酸苯乙酯两种咖啡酸脂类衍生物和咖啡酸酰胺类衍生物,总结缩合试剂、原料反应摩尔配比以及反应时间对合成物的产率影响程度,并针对咖啡酸、咖啡酸苯乙酯以及不同的咖啡酸酰胺衍生物对于45只小鼠降血糖的作用进行
白酒酿造我国的传统民族工业,在食品工业中的地位举足轻重,一直以来主要采用人工传统的方式生产,伴随着劳动力成本的不断攀升,土地资源的日益紧张,能源消耗的形势愈发严峻,以及生产环境更加严格的要求等,中国传统白酒生产方式的改变已经迫在眉睫,传统的白酒生产必须向酿酒操作机械化、自动化方向发展。本研究针对清香型白酒的生产工艺,开发制曲和酿造工序的关键装备,构建清香型白酒的机械化酿造工艺,对机械化制曲和酿造工
随着社会老龄化趋势日益明显,脑卒中发生率呈进行性上升趋势。大量临床研究发现,脑卒中患者不仅会伴有肢体功能障碍,同时还会出现情感障碍和认知功能障碍,这些都是影响脑卒中患者生活质量的主要原因。本研究通过分析奥拉西坦治疗脑卒中患者前后的神经功能缺损和日常生活能力变化,并与吡拉西坦及奥拉西坦+尼莫地平等治疗方案作对比研究,探讨奥拉西坦在脑卒中治疗中的应用价值。本研究以我院自2014年2月至2017年10月
莲子心作为《中国药典》2015年版收录的药材,其基本特征为:莲子心制作成粉剂呈绿色,显微镜下样品叶肉细胞近似圆形,且含有较多绿色色素和淀粉粒,其表皮细胞壁较薄,其胚根细胞呈现整齐排列的长方形,且细胞内含有脂肪油滴,而幼叶细胞之间存在较大空隙。药理作用表明,中药莲子心不仅具有益肾涩精、养心安神等作用,还具有补脾止泻、止带等功效。莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱是从莲子心中得到三种生物碱的主要成分。本论文
替米沙坦作为一种新型苯并咪唑类结构的治疗高血压药物,其独特双咪唑分子结构更容易被人体吸收,特异性好,因此不会对包括心血管调节在内的其它受体系统的调节造成影响。替米沙坦作为唯一具有全面保护心血管适应症的沙坦类药物,已成为当前心血管病治疗领域的研究热点,在心血管、内分泌、肾病和神经系统等众多领域的临床医学方面倍受关注。目前文献公开的替米沙坦合成路线很多,其基本策略都是先合成2-正丙基-4-甲基-6-苯
近年来,随着更安全、更环保变压器需求的不断增加,研究人员开始把研究重点放在具有环保性能的变压器绝缘油,对用于绝缘油中的新型绝缘介质提出了更高的要求,加入新型介质的绝缘油要求能够满足易降解,闪点高于300℃,污染低。在研究中发现,在输配电变压器中加入食用油的绝缘液体比常规绝缘矿物油具有更大的绝缘、环保和高阻燃优势。本文在对国内外新型绝缘油研究现状总结分析的基础上,对自行研制的植物绝缘油的理化及电气性