椎间盘组织中TNF-α、IL-18的检测及意义

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:IDYLL123
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目的:通过测定TNF-a及IL-18在正常组与退变组椎间盘组织中的表达,探讨其在椎间盘突出中的作用,进一步了解椎间盘退变的发生机制。 方法:收集新疆石河子大学医学院第一附属医院骨科椎间盘突出症患者术后椎间盘病理标本34例用于实验组;取脊柱骨折外伤术后椎间盘组织标本7例,并取石河子大学医学院病理科尸检椎间盘标本8例,共15例用于对照组。每一例标本取出后一部分经福尔马林固定24小时,石蜡包埋后制成4μm切片;另一部分研磨成匀浆离心提上清液后贴好标签存放于中心实验室-73℃冰箱。每1例标本常规HE染色后进行病理诊断,并将已制成4μm切片标本应用免疫组化链霉素亲生物素-过氧化物酶法(S-P法)对切片分别进行抗TNF-a蛋白抗体及抗IL-18蛋白抗体染色,显微镜下观察显色情况;将事先准备好的组织匀浆离心取上清液进行Elisa法测定:先取出试剂盒平衡至室温进行下一步操作,取出反应板按照试剂盒中的说明抽取定量的标准品于相应的反应孔中,后加入组织匀浆于相应孔,室温孵育30分钟后洗板再依次按顺序加入显色液与终止液,最后在酶标仪读取OD值,进而以标准品浓度绘制标准曲线,将OD值转换成相应的浓度值,进行统计学处理。 结果:光镜下观察,免疫组化链霉素亲生物素-过氧化物酶法(S-P法)试验后TNF-a、IL-18蛋白表达阳性细胞表现为细胞浆中出现棕黄色、褐色或浅棕黄色染色,结果判定、统计学分析后表明:实验组TNF-a蛋白表达高于对照组,差异有统计学意义,实验组IL-18蛋白表达高于对照组,差异有统计学意义。Elisa法证实实验组中TNF-a的含量为82.18±21.91pg/ml,IL-18的含量为45.39±21.23pg/ml:对照组中TF-a含量为8.68±0.78pg/ml、IL-18含量为3.58±2.84pg/ml。两者差异均有统计学意义。 结论:椎间盘组织中细胞因子TNF-a及IL-18的表达与椎间盘退变有关,推测可能是导致椎间盘组织退变的原因之一。
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