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目的:建立亚急性甲基苯丙胺中毒大鼠模型(Rat Subacute MethamphetamineIntoxication Model),观察亚急性MA中毒大鼠行为学改变和脑内多巴胺能神经毒性的变化,探讨亚急性MA中毒大鼠行为学改变的神经生物学基础以及MA中毒多巴胺能神经毒性的损伤机制。方法:腹腔注射甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)建立雄性Wistar大鼠亚急性MA中毒模型90只,随机分为对照组(n=30只)、低剂量组(n=30只)和高剂量组(n=30只)。实验组分别腹腔注射MA10mg/kg和20mg/kg,给药时间为20:00时,qd×4d;对照组相应给予同等剂量的生理盐水。观察并记录大鼠刻板行为以及条件位置偏爱性结果。分别于末次给药后1天,7天,14天处死实验大鼠,用抗酪氨酸羟化酶(tyrosinehVdroxylase,TH)和抗多巴胺-β-羟化酶(抗DBH)单克隆抗体,行免疫组化(S-P法),联合标记中脑黑质致密区(SNC)、中脑腹侧被盖区(VTA)、前额叶皮质(PFC)、尾壳核(CPu)、伏隔核(NAc)、杏仁核(AM)以及海马(Hi)七个脑区的多巴胺能神经元和神经纤维,进行定性及半定量检测。用光镜对大鼠中脑SNC和VTA的TH阳性细胞进行观察和计数,并对PFC,CPu,NAc,Hi,AM的TH阳性纤维密度和强弱进行定性和半定量检测;用图像分析系统对上述脑区的TH阳性细胞和TH阳性神经纤维进行定量分析;并利用多巴胺标准比对品,采用荧光分光光度计对七个脑区进行多巴胺的定量检测。结果:(1)亚急性甲基苯丙胺中毒大鼠模型建立成功。刻板行为与对照组相比,高低剂量组均具有显著差异性(P＜0.05),并且高剂量组与低剂量组相比,差异亦具有显著性(P＜0.05)。CPP测试结果,与对照组相比,除低剂量d1组差异具有显著性(P＜0.05)外,其余各组在实验偏爱侧停留时间虽有不同程度的延长,但差异无显著性(P＞0.05)。(2)黑质致密区和腹侧被盖区TH阳性细胞图像分析结果:黑质致密区和腹侧被盖区TH免疫反应阳性表达,低剂量d1组,出现一过性的升高(p＜0.05),d7组降低(P＜0.01),d14组有所恢复,差异无显著性(P＞0.05)。与对照组相比,高剂量组TH免疫反应阳性降低,差异具显著性(p＜0.05),d1组开始降低(p＜0.05),d7组达到低谷(p＜0.01),d14天组黑质致密区和腹侧被盖区TH免疫反应阳性有不同程度的恢复(P＜0.05)。(3)中脑黑质致密区和中脑腹侧被盖区TH阳性细胞计数分析结果:黑质致密区TH阳性细胞数,与对照组相比,低剂量d1组增多(p＜0.05),低剂量d7组回减(p＜0.01)、d14组基本恢复(P＞0.05)。高剂量d1组开始减少(p＜0.05),d7组达到低谷(p＜0.01),d14组仍未恢复(P＜0.05)。在腹侧被盖区TH阳性细胞数,与黑质致密区TH阳性细胞数的变化基本相同,与对照组相比,低剂量d1组增多(p＜0.05),低剂量d7组回减(p＜0.01)、d14组基本恢复(P＞0.05)。高剂量d1组开始减少(p＜0.05),d7组达到低谷(p＜0.01),d14组仍未恢复(P＜0.05)。(4)尾壳核、前额叶皮质、伏隔核、杏仁核以及海马TH阳性纤维图像定量分析结果:与对照组相比,低剂量d1天组尾壳核TH阳性免疫反应增强(p＜0.05),d7组阳性反应减弱(p＜0.01),d14组有所恢复。与对照组相比,高剂量组TH免疫反应阳性均减低(p＜0.05),d7组阳性反应最弱(p＜0.01),d14组仍未恢复(P＜0.05)。伏隔核、杏仁核与前额叶皮质TH免疫反应阳性的变化与尾壳核的变化基本一致,但程度较轻,伏隔核、杏仁核低剂量d14组基本恢复(P＞0.05),而前额叶皮质与海马低剂量d14组有所恢复但无统计学意义(P＜0.05)。(5)前额叶皮质、尾壳核、伏隔核、杏仁核及海马TH阳性纤维密度和强弱半定量分析结果:与上述TH阳性纤维图像定量分析结果基本一致。(6)黑质致密区、腹侧被盖区、尾壳核、伏隔核、前额叶皮质、杏仁核以及海马荧光分光光度计检测DA递质含量结果:与上述免疫组化结果基本一致。(7)各脑区免疫组化,DBH反应均为阴性。各脑区TH免疫组化结果以及DA含量检测结果均呈剂量依赖性变化。结论:1大鼠黑质致密区、腹侧被盖区、前额叶皮质、尾壳核、伏隔核、杏仁核以及海马TH阳性表达和各脑区的DA含量,除低剂量d1组一过性升高外,其余各组均出现不同程度的减低,并呈剂量依赖性改变。据此推测:1.1亚急性MA中毒大鼠,行为学改变与黑质—纹状体多巴胺神经系统的TH活性以及DA递质含量的变化有关。1.2亚急性MA中毒大鼠,精神活动异常(CPP效应)与中脑边缘多巴胺神经系统的TH活性以及DA递质含量的变化有关。1.3 MA的药物依赖作用,可能与多巴胺神经系统的可塑性变化有关。2、亚急性MA中毒,大鼠各脑区DA递质含量的变化与TH的变化结果基本一致。3、亚急性MA中毒多巴胺能神经系统毒性作用可能与以下分子生物学机制有关:①DA神经系统的可塑性变化;②DA参与MA对神经元的兴奋性毒性作用;③DA与其他神经递质的相互关系等。